Avaliação da etiologia molecular de casos de DDS 46,XX testicular/ovotesticular SRY-negativo por Sequenciamento Genômico Completo - Neves, Nicolle Pelicer Castro [UNIFESP] (2023)
A determinação do sexo em humanos depende do equilíbrio entre as vias de sinalização celular pró-testicular e pró-ovariana, as quais atuam em paralelo e de modo antagônico. No desenvolvimento gonadal típico em indivíduos 46,XY, a expressão do gene SRY atua como gatilho para ativação do fator SOX9 e, por consequência, iniciação de uma programação molecular de determinação pró-testicular. Por outro lado, em indivíduos 46,XX, o fator SOX9 é reprimido por outros fatores, como FOXL2 (via WNT4/ß-catenina), bloqueando o desenvolvimento testicular. Mais de 40 condições distintas resultam de alterações do desenvolvimento gonadal e, atualmente, são agrupadas como Diferenças do Desenvolvimento do Sexo (DDS). Entre essas, a condição de DDS 46,XX testicular/ovotesticular (DDST/OT) compreende aqueles casos em que há desenvolvimento de testículo ou ovotestis em embriões 46,XX. Apesar da translocação do SRY ser uma explicação para parte dos casos de DDST/OT 46,XX, a maioria dos casos SRY-negativos não possuem diagnóstico molecular. Neste projeto, foi investigado a etiologia molecular de três novos casos de DDS 46,XX testicular/ovotesticular SRY-negativo, advindos de três famílias distintas, por meio de Sequenciamento Genômico Completo (WGS), buscando-se por SNPs, Indels, variações de número de cópias (CNVs), ncRNAs candidatos e da inserção de elementos transponíveis em genes candidatos com ferramentas de bioinformática e posterior confirmação por Sequenciamento de Sanger. Desse modo, o objetivo do presente projeto foi identificar novas variantes em regiões codificantes e regulatórias do genoma associadas à DDST/OT SRY-negativo, contribuindo para a elucidação do diagnóstico molecular. O WGS identificou variantes nas regiões não codificantes dos genes NR5A1, SOX9, WT1 e FOXL2NB. Essas variantes foram sequenciadas pela metodologia de Sanger, porém as variantes presentes nos genes NR5A1, WT1 e FOXL2NB não foram confirmadas por este sequenciamento, enquanto a variante no gene SOX9, também estava presente na mãe 46,XX típica, sendo este um critério de descarte. A busca por CNVs não resultou em variantes associadas com o fenótipo. Concluímos esse estudo sugerindo o uso de Sequenciamento de Nova Geração (NGS) com tecnologias mais avançadas de sequenciamento de leituras longas (long-reads).