Extrato diclorometano de Eugenia punicifolia: modulação do fenótipo colinérgico na retina de ratos neonatos in vitro - Cabo, Carolina Serra Jogaib (2014)
Estudos sobre os efeitos do extrato aquoso da Eugenia punicifolia (EP) demonstram sua ação na neurotransmissão da junção neuromuscular. Entretanto, apesar de saber que o aumento da neurotransmissão colinérgica pode apresentar atividade neuroprotetora e atuar na plasticidade neuronal, não existem estudos sobre o efeito do extrato de EP em células do sistema nervoso central. O objetivo deste trabalho foi estudar o efeito do extrato diclorometano de EP sobre células da retina de ratos neonatos in vitro no que tange à proliferação celular, modulação do fenótipo colinérgico e aos níveis de fator de crescimento do nervo (NGF), fator neurotrófico derivado do cérebro (BDNF) e da interleucina IL-4. Foram realizadas culturas primárias de células da retina de ratos neonatos da linhagem lister hooded de ambos os sexos, dia pós-natal 0-2. As culturas foram plaqueadas em placas de petri pré-tratadas com poli-L-ornitina, na densidade de 1,0x105 cel/cm2, receberam meio 199 ou 1μg/mL do extrato diclorometano de Eugenia punicifolia (EP 1μg/mL) e foram mantidas por 48 horas a 37°C, em atmosfera de 95% de ar e 5% de CO2. O método bioquímico utilizado para análise da proliferação celular foi a incorporação de [3H]-timidina. Os níveis dos receptores muscarínicos, de neurotrofinas e citocinas foram determinados por western blot. Todos os dados são apresentados em relação à porcentagem do controle (100%). Os procedimentos experimentais foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da UFF (Projeto nº 186/2012). Os resultados mostram que o tratamento das culturas com diferentes concentrações do extrato diclorometano de EP por 48h induziu aumento dependente da concentração na proliferação celular, sendo o aumento mais significativo observado na concentração de 1μg/mL, concentração que foi utilizada em todos os experimentos. Foi observada a redução nos níveis dos receptores muscarínicos M1 e M4, e nos níveis de transportador de acetilcolina associado à vesícula, aumento na expressão do receptor M3 e nenhuma alteração nos níveis do receptor M5. Observou-se, também, que o extrato diclorometano de EP aumenta os níveis de NGF e da interleucina-4, e diminui dos níveis de BDNF. Os resultados sugerem que o extrato diclorometano de EP exerce efeito proliferativo e de diferenciação através da alteração do fenótipo colinérgico da retina e da participação de fatores neurotróficos