Investigação de CHK1 como potencial alvo terapêutico em melanomas resistentes a inibidores de BRAF - Carvalho, Danielle Gonçalves de (2016)
O melanoma é um tipo de câncer de pele com alto potencial metastático e resistente às terapias convencionais. A maioria destes tumores apresenta a via de MAP Quinase constitutivamente ativa, o que permitiu o desenvolvimento de terapias alvo-específicas voltadas para a inibição desta via. O tratamento com inibidores de BRAF (iBRAF), proteína cujo gene é frequentemente mutado em melanomas, ou com a combinação de inibidores de BRAF e MEK, demonstram um importante aumento na sobrevida dos pacientes. Entretanto, a resistência terapêutica ainda representa um grande desafio clínico. Resultados preliminares do nosso grupo demonstram que células de melanoma resistentes aos iBRAF são mais sensíveis ao AZD7762, inibidor das quinases Chk1 e Chk2, quando comparadas com suas respectivas células parentais. Essas proteínas são essenciais no controle da progressão do ciclo e sinalização celular frente a danos ao DNA, orquestrando mecanismos de reparo ou, caso as lesões sejam irreparáveis, de morte programada. Atualmente, pouco se sabe sobre a participação da via de resposta a danos ao DNA na resistência aos iBRAF. Entretanto, devido à ausência de terapias eficientes para pacientes que desenvolvem resistência, o potencial da inibição de Chk1/2 como estratégia terapêutica merece um estudo mais aprofundado. Neste trabalho investigamos o papel de Chk1 e seu potencial como alvo terapêutico no tratamento de melanomas resistentes aos iBRAF. Para tal, comparamos células parentais (A375) e resistentes (A375R1) quanto à sensibilidade ao GDC0575, inibidor específico de Chk1. Células parentais e resistentes foram expostas a este inibidor e analisadas quanto à morte celular através da marcação de DNA fragmentado (Sub-G0) com Iodeto de Propídeo (PI). Para investigar as diferenças na progressão e controle do ciclo celular, as células foram sincronizadas na transição G1/S com duplo bloqueio de Timidina e analisadas através da marcação com PI e Bromodesoxiuridina (BrdU). Ambas as análises foram realizadas por citometria de fluxo. Nossos dados demonstram maior efeito citotóxico da inibição de Chk1 em células de melanoma resistentes quando comparadas as suas respectivas parentais. A análise de Sub-G0 comprovou que a perda da viabilidade após a exposição ao inibidor de Chk1 é causada por morte celular, sendo mais intensa nas células resistentes. Observamos também que estas células apresentam alterações na progressão do ciclo celular, especialmente no controle do ponto de checagem G1/S. As diferenças observadas neste estudo podem guiar a busca pelos mecanismos responsáveis pela resistência terapêutica. Além disso, nossos resultados podem levar a potenciais benefícios clínicos, representando uma nova abordagem terapêutica em melanomas resistentes às terapias atuais.