Expressão celular do receptor CD44 e sua associação com mutações do gene RAS em leucemia linfoblástica aguda/linfoma linfoblástico-T pediátricos - Marques, Luísa Vieira Codeço (2016)
As leucemias linfoblásticas agudas de células T (LLA-T) representam 15% dos casos de LLA pediátricas, e são associadas a um pior prognóstico, bem como características clínicas semelhantes ao linfoma linfoblástico de células T (LLb-T). CD44 é uma glicoproteína multifuncional de adesão que ajuda na migração de células precursoras da medula óssea para o timo, no desenvolvimento de linfócitos T. A expressão de CD44 foi associada à progressão tumoral, influenciando na sobrevida e infiltração em órgãos em modelos murinos de LLA-T. O gene CD44 é um alvo da via de RAS, que desencadeia o seu splicing alternativo, criando um loop de feedback positivo. A variante 6 de CD44 se liga a fatores de crescimento e seus receptores, sustentando assim a sinalização de RAS. OBJETIVOS: Determinar o perfil da expressão celular do receptor CD44 entre diferentes subtipos maturativos de LLA-T pediátricas, como possível preditor a mutações em RAS; comparar a expressão de CD44 com as características clínicas do paciente, assim como entre LLA-T e LLb-T e recaída de LLb-T com infiltração medular. METODOLOGIA: Foi utilizada uma série de 175 pacientes (≤ 21 anos), avaliada quanto ao perfil imunofenotípico através da citometria de fluxo multiparamétrica e sequenciada para detecção de mutação nos códons 12, 13 dos genes N/KRAS. Ao painel de diagnóstico de LLA-T foi inserido o tubo CD4FITC/CD7PE/CD45PercP-cy5.5/CD8Pe-cy7/CD44APC para avaliação da expressão do CD44 pela Intensidade mediana de fluorescência (IMF) em blastos e linfócitos dos pacientes leucêmicos (n = 64) e células precursoras do sangue de cordão umbilical (SCU) (n = 6). RESULTADOS: Foi utilizado o valor da IMF no percentil 75 como cutoff para discriminar entre os grupos com expressão alta e baixa do CD44. O perfil imunofenotípico demonstra que 16 casos de 171 (9,4%) foram LLA de células precursoras T precoces (LLA-ETP), 38 (22,2%) foram pré-T, 70 (40,9%) T cortical e 47 (27,5%) T madura. Linfoblastos de LLA-T (IMF: 2249 [68-12751]) possuem uma menor expressão de CD44 que linfócitos de casos de LLA-T (IMF: 14254 [324-28897]), assim como de SCU (IMF: 9476 [6834-19785]). Dois casos de 64 foram negativos para CD44 (<20% blastos positivos). O grupo de pacientes com a alta expressão de CD44 apresentou uma tendência a ter uma leucometria menor que 50000/μL comparados ao grupo de pacientes com baixa expressão (p=0,05). Não foi observada associação entre a alta expressão de CD44 com a presença de organomegalia. LLA-ETPs têm uma maior expressão de CD44 (IMF: 3839 [1966-6526]) que os subtipos mais maduros de LLA-T (pré-T: 1106 [68-6080], T cortical: 1982 [290-5376], T madura: 2572 [92-12751]) (p=0,03). Amostras de LLb-T de diagnóstico (IMF: 755 [555-955]) e de recaída (IMF: 1123 [529-1641]) têm menor expressão de CD44 que LLA-T (IMF: 2249 [68-12751]) (p= 0,02). Dos 168 N/KRAS sequenciados, 15 (8,9%) estavam mutados. Não houve diferença significante de características clínicas (leucometria e organomegalia), cor da pele, sexo e subtipo de LLA-T de acordo com o status de N/KRAS. Pacientes com N/KRAS mutado possuem mais frequentemente idade <10 anos (p = 0,03). Não houve diferença significante de expressão do CD44 entre casos com mutação no N/KRAS (IMF: 3670 [840-8325]) e sem a mutação (IMF: 2249 [194-12750]) (p=0,09). CONCLUSÕES: Alta expressão de CD44 não se mostrou relevante para a infiltração em órgãos de pacientes, porém pacientes com alta expressão apresentaram uma menor leucometria que os pacientes com baixa expressão. A expressão de CD44 também está ligada ao nível maturativo do blasto, tendo LLA-ETPs maior expressão. LLb-T e recaída de LLb-T possuem uma menor expressão de CD44 que LLA-T. Mutação em N/KRAS não leva a uma maior expressão de CD44 em LLA-T pediátricas.