Perfil clÃnico e molecular de pacientes portadores de neoplasia endÃcrina mÃltipla tipo 1 - Daniel Pascoalino Pinheiro (2012)
A NEM1 Ã uma sÃndrome rara com padrÃo de transmissÃo autossÃmico dominante, causada por uma mutaÃÃo que inativa o gene MEN1 (gene supressor tumoral). Define-se sua presenÃa pela ocorrÃncia associada de dois dos trÃs principais tumores endÃcrinos relacionados Ã NEM-1: hiperparatireoidismo primÃrio (HPT), adenomas hipofisÃrios (AH) e tumores gastroenteropancreÃticos (TEPs) secretores ou nÃo. O gene MEN1, envolvido nessa sÃndrome, consiste de 10 exons (exon 1 e 832 bases do exon 10 nÃo sÃo traduzidos), codificando uma proteÃna que contem 610 aminoÃcidos, denominada MENIN. Mais de 459 diferentes mutaÃÃes germinativas jÃ foram identificadas em famÃlias com NEM1. Um total de 8 famÃlias e 2 casos esporÃdicos foram estudados, perfazendo um total de 33 pacientes com NEM1. Foram coletados 4mL de sangue perifÃrico para extraÃÃo de DNA e RNA utilizando os kits QIAamp DNA Blood Mini e QIAamp RNA Blood Mini, respectivamente, ambos da QIAGENÂ. Os nove exons da regiÃo codificadora do gene MEN1 foram amplificados por PCR e submetidos, apÃs purificaÃÃo, Ã reaÃÃo de sequenciamento. Em seguida as amostras foram analisadas atravÃs de eletroforese capilar. As sequÃncias geradas foram analisadas utilizando o software CondonCode Aligner, afim de traÃar um perfil mutacional. As amostras de RNA foram convertidas em cDNA e analisadas em PCR tempo real. A idade mÃdia dos pacientes estudados foi de 40,7Â12,7 anos, onde a prevalÃncia dos tumores associados a NEM1 foi: HPT, 87,8% (29/33); adenoma hipofisÃrio, 81,8% (27/33); TEPs, 54,5% (18/33); outros tumores associados a NEM1, 63,6% (21/33). Como primeira manifestaÃÃo nesses pacientes, os adenomas hipofisÃrios prevaleceram, ocorrendo em 57,5% (19/33). ApÃs sequenciamento automÃtico de toda a regiÃo codificadora do gene MEN1, foram encontradas mutaÃÃes germinativas em sete famÃlias portadoras de NEM1 estudadas e em um dos casos esporÃdicos. TrÃs diferentes mutaÃÃes foram identificadas, estando presentes nos exons 3 e 6: duas do tipo misssense (mutaÃÃes pontuais), c.597 C>T (H199H) e c.830 C>G (P277R); e uma do tipo splice-site (mutaÃÃes nas regiÃes de junÃÃo exon-intron), c.654 +1 G>T (IVS3+1G→T). NÃo foi possÃvel estabelecer uma associaÃÃo entre genÃtipo-fenÃtipo nesses pacientes portadores de NEM1. Foram observadas diferenÃas no perfil de expressÃo. O gene MEN1, nos pacientes com NEM1 estudados, estava regulado negativamente, quando comparado ao grupo controle.