PRODUÇÃO DE CAPRINOS TRANSGÊNICOS PARA O FATOR ESTIMULANTE DE COLÔNIAS DE GRANULÓCITOS HUMANO (hG-CSF) E CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA DA FÊMEA FUNDADORA - MOURA, RAYLENE RAMOS (2011)
Caprinos têm sido utilizados como modelo de animais transgênicos secretando várias proteínas recombinantes no leite, dentre as quais o Fator Estimulante de Colônias de Granulócitos humano (hG-CSF). Assim, este trabalho teve por objetivos: (i) produzir caprinos transgênicos fundadores para o hG-CSF e propagar o rebanho transgênico; (ii) caracterizar a dinâmica de produção do hG-CSF durante a lactação induzida da fêmea transgênica (FT), verificar a potencial expressão ectópica e desordens gerais de saúde da FT; (iii) monitorar ciclos estrais da FT por progesteronemia e avaliar a atividade ovariana, além de realizar superovulação e recuperação embrionária utilizando dois métodos (laparotomia e transcervical) para posterior transferência para receptoras a fim de acelerar a obtenção de descendentes da fêmea fundadora transgênica. Dois caprinos fundadores para o hG-CSF foram produzidos por microinjeção pronuclear, um macho (10M) e uma fêmea (12F). Após a reprodução dos fundadores, nove crias transgênicas foram obtidas. A FT secretou hG-CSF no leite de 93,9 a 1.474,6 μg/mL durante a lactação induzida. A proteína recombinante induziu a diferenciação de células-tronco umbilicais humanas em granulócitos neutrófilos apresentando atividade biológica in vitro. Não foi detectado hG-CSF sérico fora do período de lactação indicando ausência de expressão ectópica. Durante o tratamento hormonal de indução da lactação, a FT apresentou um aumento da contagem de neutrófilos, linfócitos e monócitos quando comparado com a fêmea não transgênica (FNT). O perfil de bioquímica sérica indicou funções hepática e renal compatíveis com a espécie. O intervalo médio entre os estros foi de 20,7 ± 0,6 e 19,7 ± 0,6 (P > 0,05) dias para FT e FNT, respectivamente. As concentrações de progesterona e atividade ovariana apresentaram-se normais em ambas as fêmeas. O número de ovulações foi similar entre a FT e FNT (12,0 ± 1,4 vs. 18,0 ± 4,2 CL; P > 0,05). Da mesma forma, nenhuma diferença significativa (P > 0,05) foi observada entre o método de recuperação de embriões cirúrgico e transcervical na FT (69,2% vs. 72,7%) e FNT (100,0% vs. 86,7%). Dezesseis embriões da FT foram transferidos para receptoras e oito crias foram obtidas. Três crias transgênicas, dois machos e uma fêmea, foram identificadas obtendo-se uma taxa de transgênicos de 37,5%. Dessa maneira, a cabra transgênica fundadora se mostrou saudável durante e após o período experimental, fértil por ter sido capaz de transmitir o transgene à progênie, além de expressar hG-CSF em quantidade suficiente para um biorreator comercial. Palavras-chave: Caprino. Transgênese. hG-CSF. Lactação. Reprodução XI