O stress do retículo na remodelação do perfil lipídico do macrófago - Martins, Ana Sofia da Costa (2014)
As doenças cardiovasculares representam a principal causa de mortalidade nos países desenvolvidos. Na sua génese encontra-se frequentemente a aterosclerose, um processo inflamatório crónico de origem multifatorial caracterizado pela acumulação e oxidação de lipoproteínas e recrutamento de macrófagos para o subendotélio arterial. A progressão da patologia encontra-se intimamente ligada à disfunção e morte dos macrófagos após fagocitose de lipoproteínas oxidadas. Embora não totalmente conhecido sabe-se que este processo envolve o desenvolvimento de stress do reticulo e ativação dos vários ramos da unfolded protein response (UPR). Neste contexto definiram-se dois objetivos a serem desenvolvidos no presente trabalho. No primeiro pretendeu-se compreender a influência do stress do retículo no metabolismo lipídico de macrófagos e as suas possíveis relações com a progressão da aterosclerose. Para tal foi usada como modelo experimental a linha celular de macrófagos de murganho RAW 264.7 estimulada com os indutores de stress Tunicamicina e 7-Cetocolesterol. Através de uma abordagem lipidómica determinou-se o efeito do stress do retículo no perfil lipídico do macrófago e através de qPCR foi avaliado o seu efeito num painel de genes envolvidos no metabolismo lipídico. Sucintamente, verificou-se o aumento da percentagem relativa das classes de fosfolípidos PI, LPC, PS, CL e PG, sendo em contrapartida observada uma diminuição de PC, SM e PE, consistente para ambos os estímulos. Ao nível dos ácidos gordos, verificou-se a alteração no rácio de saturados/insaturados, com aumento relativo dos primeiros. A diminuição observada na percentagem de ácidos gordos insaturados, a qual sugere a oxidação dos mesmos, foi corroborada pelo aumento detetado na percentagem de hidroperóxidos lipídicos e pela formação de espécies reativas de oxigénio para ambos os estímulos. A análise do efeito do stress do retículo na transcrição de genes envolvidos no metabolismo lipídico mostrou existirem diferenças substanciais no perfil obtido para cada um dos estímulos usados. A segunda parte do trabalho prendeu-se no estudo da capacidade dos fosfolípidos oxidados em induzir stress do retículo endoplasmático. Para tal tratou-se as células RAW 264.7 com o fosfolípido 1-palmitoil-2-linoleoil-sn-glicero-3-fosfocolina (PLPC) oxidado em condições de Fenton. No entanto os resultados preliminares alcançados não permitiram inferir conclusões no que respeita à capacidade do fosfolípido PLPC oxidado em ativar os diversos ramos da UPR.