Validação de um método analítico para a determinação de antidepressivos em amostras de sangue por LC-MS/MS - Coelho, Maria (2023)
O consumo dos antidepressivos (AD) na última década tem vindo a aumentar e, portanto, a solicitação para a sua deteção em amostras biológicas no Serviço de Química e Toxicologia Forense (SQTF) tem sido cada vez maior. Por este motivo, é necessário que haja uma contínua evolução científica de técnicas de deteção e a respetiva validação de forma a acompanhar este crescimento. Este trabalho teve como objetivo a validação de um método analítico para determinação simultânea de 20 AD (amitriptilina, bupropiona, citalopram, clomipramina, dosulepina, duloxetina, fluoxetina, fluvoxamina, imipramina, maprotilina, mianserina, mirtazapina, paroxetina, reboxetina, sertralina, tianeptina, trazodona, trimipramina, venlafaxina e vortioxetina) e 11 metabolitos. Material e Métodos : O procedimento analítico para a determinação de AD em amostras de sangue (100 μL) envolveu uma precipitação proteica (PP) e a sua posterior análise por cromatografia líquida (LC) acoplada a espectrometria de massa sequencial (MS/MS), usando electrospray (ESI) como fonte de ionização e deteção por monotorização de reações múltiplas (MRM). Na separação cromatográfica foi utilizada uma coluna Acquity UPLC HSS T3 (100 mm x 2,1 mm, 1,8 μm) e a fase móvel constituída por uma solução aquosa de formato de amónia 2 mM (com ácido fórmico 0,1%) e metanol, em modo gradiente, com um fluxo de 0,4 mL/min e um volume de injeção de 10 µL. Resultados e Discussão :O método foi validado de acordo com as diretrizes AAFS Standards Board (ASB). Os parâmetros de validação estudados incluíram: estudo das interferências, supressão iónica, linearidade, arrastamento, precisão e exatidão, limites de deteção e quantificação, integridade de diluição e estabilidade. O método demonstrou a ausência de interferentes por parte de outras substâncias e do padrão interno, com exceção da maprotilina e nortriptilina que evidenciaram interferir entre si, em particular na segunda transição iónica. A gama de trabalho escolhida demonstrou ser linear, considerando um fator de ponderação de 1/x, sempre com um coeficiente de correlação superior a 0,99. Não foi detetado nenhum fenómeno de arrastamento ou efeito matriz relevante. Os limites de deteção e quantificação obtidos são adequados tendo em conta a gama de trabalho estudada. No estudo da precisão (precisão intermédia e repetibilidade) e da exatidão, os resultados obtidos de coeficiente de variação (CV) foram <20,0 %. Para estas substâncias medicamentosas verificou-se estabilidade até às 72 h a uma temperatura ambiente e 1 semana após um processo de congelação. O estudo da integridade de diluição demonstrou ter precisão e exatidão na diluição de 1:5 (v/v). Conclusões : O método analítico descrito cumpriu todos os parâmetros de validação necessários segundo as diretrizes seguidas, pelo que se pode concluir que permite determinar e quantificar simultaneamente os 20 ADs e 11 dos seus metabolitos em amostras de sangue por LC-MS/MS e pode, deste modo, ser integrado na rotina do laboratório do SQTF-C do INMLCF, I.P.