Identificação de Porphyromonas gingivalis e Prevotella intermedia isoladas de pacientes com doença periodontal e análise das resistências antimicrobianas

• Main Author: Cunha, Carminda Sílvia Nunes Monteiro da
• Publication Date: 2017
• Format: Master thesis
• Language: por
• Source: Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP)
• Download full: http://hdl.handle.net/10284/6217
• topic: Periodontite; Anaeróbios pigmentados; Porphyromonas gingivalis; Prevotella intermedia; Antibióticos; β-lactamases; Periodontitis; Pigmented anaerobic; Porphyromonas gingivalis; Prevotella intermedia; Antibiotics; β-lactamases

A cavidade oral é um dos locais do organismo humano que revela a mais complexa e heterogénea população microbiana, da qual fazem parte mais de meio milhar de espécies bacterianas. A doença periodontal (DP) é uma patologia oral de origem bacteriana caracterizada por um estado inflamatório que começa por afetar o tecido gengival e cuja progressão leva frequentemente à perda de dentes na idade adulta. As gengivites e periodontites são das patologias periodontais que surgem com maior predomínio na rotina da clinica dentária. A identificação do microbioma responsável por este tipo de patologias é extremamente importante na adoção de medidas mais eficazes, quer de tratamento, quer de prevenção. Certas estirpes de bactérias de Gram negativo têm sido encontradas de forma consistente em lesões periodontais, nomeadamente as espécies Porphyromonas gingivalis e Prevotella intermedia. Estas bactérias são de Gram negativo, anaeróbias estritas, imóveis, não esporuladas e produtoras de pigmento negro. A identificação destes microrganismos pode ser realizada pelos métodos convencionais, sendo tecnicamente complexos, dispendiosos e morosos ou por diversas técnicas de biologia molecular, nomeadamente a Polymerase Chain Reaction (PCR). A prevenção e o controlo das doenças periodontais residem na eliminação do biofilme microbiano, através de hábitos de higiene oral e tratamento mecânico local. No entanto, em alguns tipos de DP torna-se necessário o uso de antisépticos e/ou antibióticos. A identificação das espécies bacterianas implicadas na DP permite a prescrição do antibiótico específico, uma vez que se tem verificado uma tendência para a abordagem terapêutica empírica o que tem conduzido para um aumento da resistência aos antibióticos, particularmente nas espécies do género Porphyromonas e Prevotella. Face ao exposto e à escassa informação acerca da identidade de estirpes bacterianas em infecções periodontais em Portugal e eventuais resistências desenvolvidas realizou-se um estudo preliminar de pesquisa das estirpes produtoras de pigmento negro, nomeadamente P.gingivalis e P. intermedia e da pesquisa da suscetibilidade antimicrobiana aos antibióticos β-lactâmicos, metronidazol, clindamicina e tetraciclina; assim como também, a pesquisa de enzimas β-lactamases. Neste trabalho foram analisadas 42 amostras de isolados subgengivais provenientes de pacientes com periodontites, da clínica dentária da Faculdade de Ciências da Saúde, da Universidade Fernando Pessoa, Porto. Das 42 amostras, apenas 14 tiveram crescimento de colónias com pigmento negro. Destas, 57,1% foram identificadas como P. intermedia, 28,6% eram P. gingivalis e 14,2% pertenciam a outras espécies pigmentadas. Relativamente à prova de sensibilidade antimicrobiana, verificou-se que todas as amostras de P. intermedia foram sensíveis aos antibióticos testados, embora 14,3% de Prevotella spp tenha-se mostrado resistente à penincilina, amoxicilina, clindamicina e tetraciclina. Nenhum dos isolados da espécie P. gingivalis mostrou resistência aos agentes antimicrobianos ensaiados. A pesquisa de β-lactamases revelou que apenas 2 amostras tinham capacidade para a produção destas enzimas. Os dois métodos utilizados neste trabalho mostraram-se eficazes no conhecimento das espécies bacterianas intervenientes na DP. Contudo, no método clássico várias amostras perderam viabilidade durante o processo de congelação, inviabilizando a sua cultura. Por outro lado, os métodos moleculares amplificaram todas as amostras tendo-se demonstrado como previsto uma técnica rápida e precisa. As estirpes isoladas de P. gingivalis e P. intermedia foram sensíveis a todos os antibióticos testados, ao contrário do referido na literatura. Este resultado pode dever-se à reduzida amostragem deste estudo. Da avaliação destes resultados preliminares é nossa proposta em estudos futuros alargar significativamente a amostragem, bem como a amplificação direta do ADN bacteriano colhido nas bolsas periodontais, de forma a não existir seleção cultural dos agentes microbianos. O estudo da suscetibilidade antimicrobiana com recurso a técnicas de biologia molecular é, também nossa proposta para a contribuição de uma maior sensibilidade e precisão de resultados.