Desenvolvimento de uma ferramenta multiplex-PCR para a deteção de Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi e Yersinia ruckeri em peixes de aquacultura - Ferreira, Marco António Macieira (2021)
As estirpes patogénicas em estudo provocam doenças devastadoras em aquaculturas de peixes da família Salmonidae e Centropomidae (e.g. Salmão e Robalo, respetivamente). Em casos de surto, as taxas de mortalidade são extremamente elevadas e as consequências são devastadoras a nível económico, causando elevados prejuízos, visto existir uma enorme dificuldade em detetar as infeções a tempo. Com o aumento da importância e do valor económico da aquacultura tornou-se fulcral que as estirpes Vibrio anguillarum, Vibrio alginolyticus, Vibrio harveyi e Yersinia ruckeri consigam ser detetadas a tempo de modo a evitar as respetivas doenças e evitar contaminações em massa. Presentemente existem algumas ferramentas, como por exemplo, vacinas e antibióticos que possuem diferentes graus de eficácia para combater as doenças provocadas por estas estirpes, no entanto são escassas as ferramentas que detetem precocemente a presença de estirpes patogénicas, de modo a atuar de forma eficaz. As ferramentas PCR são cada vez mais utilizadas, com diversas finalidades, entre as quais a deteção de patógenos, um desenvolvimento essencial na prevenção, e assim, combate a estas doenças. Dentro das várias técnicas de PCR, o multiplex-PCR tem várias vantagens comparando com o PCR convencional, destacando-se a poupança de tempo e recursos, devido à possibilidade de deteção de várias estirpes numa única reação. A rapidez de deteção de uma ferramenta de multiplex-PCR juntamente com a sua simplicidade e baixo custo torna, uma possível ferramenta de multiplex-PCR, essencial para a deteção atempada das estirpes patogénicas prevenindo a infeção, visto que as estirpes podem ser detetadas antes que se tornem infeciosas, e o contágio para outros peixes nos tanques de aquacultura. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e testar uma ferramenta de multiplex-PCR, procurando uma forma rápida, económica e eficaz para a deteção precoce de peixes infetados com as estirpes referidas de modo e evitar a sua propagação em tanques de aquacultura. Conseguiu-se em três das quatro estirpes uma deteção até 0,6 pg/μl e para a restante, Vibrio harveyi, 0,016 ng/μl. A ferramenta desenvolvida demonstra uma sensibilidade elevada, essencial para que possa ser implementada com sucesso, permitindo a deteção precoce destas bactérias patogénicas em peixes e potencialmente outros organismos.