Avaliação do impacto dos níveis de expressão de RalGPS2 em cancro do pulmão e da próstata - Diniz, Catarina Isabel da Poça (2022)
O cancro da próstata é o que mais afeta homens, sendo de todos os tipos de cancro o segundo mais frequente a nível mundial. Por outro lado, o cancro do pulmão é o mais letal. O forte impacto destas doenças a nível mundial continua a impulsionar a investigação científica sobre o seu desenvolvimento e progressão, bem como sobre o seu tratamento. A sobreativação dos cofatores transcricionais YAP/TAZ, regulados negativamente pela via supressora tumoral Hippo, tem sido associada a diversos tipos de cancro, incluindo cancro da próstata, promovendo a proliferação celular. Além disso, RalGPS2 é um fator de troca de nucleotídeos de guanina e o seu silenciamento tem demonstrado ter a capacidade de diminuir a proliferação de células tumorais, mas o mecanismo não foi totalmente esclarecido. Recentemente, foi demonstrado que o aumento da sua expressão está associado a mau prognóstico dos doentes com adenocarcinoma do pulmão, o que reforça o interesse de prosseguir com a investigação do seu papel em células tumorais. Assim, este estudo teve como objetivos principais procurar evidências de uma possível interação entre RalGPS2 e os cofatores de transcrição YAP/TAZ no cancro da próstata. Este objectivo foi atingido quer por uma abordagem experimental, avaliando o silenciamento de RalGPS2 em combinação com tratamentos que levam à inativação de YAP/TAZ, quer através de uma abordagem bioinformática, explorando dados de transcriptómica de tumores de acesso livre. Na primeira abordagem, efetuou-se o silenciamento de RalGPS2 em linha celulares de cancro da próstata (DU145 e PC3) e de cancro do pulmão (A549) em combinação com ausência de soro fetal bovino (FBS) do meio de cultura e tratamentos com sinvastatina. Na 2ª abordagem, realizou-se uma análise de dados de transcriptómica por forma a perceber qual a expressão de RALGPS2 e o seu valor prognóstico em cancro da próstata. Para além disso, avaliou-se o nível de correlação existente entre os níveis de expressão dos genes RalGPS2, YAP1 e WWTR1 em adenocarcinoma da próstata e em tumores neuroendócrinos da próstata. Tanto a ausência de FBS como a adição de sinvastatina a 10 ou 30 µM tiveram efeito na distribuição do ciclo celular na linha DU145, induzindo o aumento do número de células em fase G1 e sua diminuição na fase S. No que respeita à indução de apoptose, apenas a concentração mais elevada a induziu nesta linha, mas a sua combinação com ausência de soro teve um efeito sinérgico. Nas condições de transfeção usadas, o silenciamento de RalGPS2 não teve um efeito claro no crescimento celular das células estudadas, apesar de se poder ter devido parcialmente a ter sido usad0 um controlo de transfeção com elevada toxicidade inespecífica, e parte devido ao silenciamento incompleto do gene alvo. Quanto à sua combinação com a remoção de soro ou sinvastatina, o efeito foi maioritariamente aditivo. Contudo, este efeito não foi específico se comparado com o siRNA usado como controlo, ficando a dúvida se por não se ter usado o controlo correto. Na linha A549 verificou-se que a combinação do silenciamento com a uma baixa concentração de sinvastatina, sem efeito por si só, teve um ligeiro efeito sinérgico de inibição do crescimento celular, apesar de não se terem detetado efeitos sinérgicos na indução e apoptose ou na distribuição do ciclo celular. No que respeita à análise de transcriptómica realizada, não se detetou valor prognóstico significativo na expressão de RalGPS2 em cancro da próstata, mas verificou-se existirem evidências de uma correlação muito forte entre a expressão de YAP1 e RalGPS2 específica quer de tecido saudável, adenocarcinomas e tumores neuroendócrinos da próstata.