Autosomal dominant polycystic kidney disease - genetic diagnosis - Ferreira,Luciana Carolina Lopes, (2012)
A doença renal poliquística autossómica dominante (ADPKD) é uma doença hereditária e monogénica comum que resulta no desenvolvimento de quistos renais que aumentam em tamanho e em número com o avanço da idade, muitas vezes conduzindo ao aparecimento da doença renal terminal. Cerca de 85% dos casos identificados são causados por mutações no gene PKD1, um gene complexo de elevadas dimensões (~ 47kb). Atualmente, a sequenciação completa do gene PKD1 permite, com elevada sensibilidade, detetar variantes alélicas e pode ser utilizada em determinadas situações clínicas para as quais as técnicas radiológicas não permitem obter um diagnóstico clínico definitivo. No entanto, o rastreio de mutações é muitas vezes inconclusivo devido à presença de várias cópias homólogas a este gene localizadas no cromossoma 16, e à elevada heterogeneidade alélica do PKD1. O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um teste genético de diagnóstico para a ADPKD através da sequenciação da zona codificante e limites intrão/exão do gene PKD1, utilizando a tecnologia de Sanger e otimizado para amostras de sangue armazenadas em cartões FTA™. Procedeu-se à otimização da amplificação e sequenciação, das regiões de interesse, utilizando a tecnologia de BigDye™ Terminator V3.1 e o protocolo desenvolvido mostrou ser uma metodologia reprodutível. Mutações patogénicas foram rastreadas em amostras de dois indivíduos, não relacionados, com ADPKD. Num dos pacientes a análise revelou a presença de uma mutação causadora de um codão stop prematuro no exão 15, no segundo paciente foi detetada uma deleção de 19pb no intrão 31, originando uma alteração na frame de leitura e causando a terminação prematura da proteína. Além disso, a heterogeneidade do PKD1 foi verificada uma vez que foram detetadas várias variantes neutras nas amostras analisadas, sendo que três destas alterações resultaram em alteração de aminoácido. Este estudo demonstrou o potencial da sequenciação de Sanger no diagnóstico de doenças genéticas. Apesar de futuramente ser necessária a validação com mais amostras de pacientes com ADPKD, é possível concluir que a metodologia desenvolvida poderá conduzir a um diagnóstico genético eficaz.