Establishing model systems from olfactory mucosa stem cells - Sacramento, Sónia Raquel Capela (2013)
As células estaminais são uma classe distinta de células, devido às suas capacidades de regeneração e diferenciação em vários tipos de células especializadas. Os nichos onde estas se encontram servem-lhes de sustentação e permitem a sua manutenção num estado indiferenciado, afectando a sua regeneração e diferenciação através de estímulos. As células estaminais dividem-se em duas classes: embrionárias (pluripotentes) e adultas (multipotentes), embora também existam células estaminais pluripotentes induzidas. Nos últimos anos tem-se estudado a possibilidade de utilizar sistemas baseados em células estaminais no estudo de neuropatologias. Assim sendo, os objectivos desta dissertação foram o isolamento e proliferação de células estaminais da mucosa olfactiva, a indução destas células para a formação de neurosferas e a sua diferenciação para células tipo neuronais (NLC) e células derivadas de neurosferas (ONS). Também se procedeu à diferenciação das ONS e à caracterização dos modelos celulares NLC e ONS. Para se atingir os objectivos definidos, foram recolhidas biópsias de mucosa olfactiva e isolaram-se células estaminais de epitélio e da lâmina própria. As células estaminais da mucosa olfactiva proliferaram e foram induzidas a formar neurosferas com um meio de cultura específico (DMEM/F12 com ITS-X, EGF e FGF2). As neurosferas foram posteriormente diferenciadas em células ONS (com meio DMEM/F12) e em NLC (com meio neurobasal suplementado com NGF, B27, glutamina e glutamato). Imagens obtidas durante o tempo de diferenciação das NLC foram analisadas tendo em conta parâmetros morfométricos. As células ONS foram adaptadas à cultura em meio sem soro e diferenciadas em células tipo neurónios (usando meio DMEM/F12 com N2 e meio DMEM/F12 com B27). Os resultados obtidos indicam que estabelecemos culturas primárias de células estaminais da mucosa olfactiva de rato. A eficiência dos protocolos de isolamento e proliferação foi confirmada pela marcação com nestina através de imunofluorescência e pela formação de neurosferas. A análise morfométrica das NLC indicou que diferenciámos as neurosferas para células tipo neuronal, devido à sua morfologia neuronal e à expressão do marcador neuronal β-tubulina III. Foram também estabelecidas culturas de células ONS, posteriormente diferenciadas através da redução de soro, apresentando um fenótipo tipo neuronal quando mantidas em meio definido. Contudo, devem ser realizadas experiências futuras para a caracterização deste novo modelo celular. Os nossos resultados permitem-nos concluir que estabelecemos e caracterizámos novos sistemas modelo baseados em células estaminais. Estes resultados são relevantes uma vez que tais modelos podem ser usados para o estudo de mecanismos celulares e moleculares envolvidos em inúmeras neuropatologias, nomeadamente na Doença de Alzheimer.