Estudos ecológicos e moleculares dos hospedeiros intermediários Planorbarius metidjensis e Bulinus truncatus de Portugal - CALADO, Maria Manuela Palmeiro (2008)
Planorbarius metidjensis e Bulinus truncatus, identificados como hospedeiros intermediários de Schistosma haematobium e S. bovis, foram o objecto do nosso estudo. Este trabalho está dividido em seis capítulos que de certo modo, se encontram relacionados entre si. No Capítulo 1, faz-se uma abordagem geral sobre estas duas espécies de moluscos com importância em medicina, com breves considerações sobre a sua classificação, características morfológicas e distribuição no mundo e em Portugal. Do mesmo modo, a revisão de literatura realça aspectos importantes relacionados com interacção do molusco, hospedeiro intermediário e o tremátode parasita e a aplicação das novas técnicas moleculares nesta área. No intuito de rever a distribuição geográfica destas duas espécies de moluscos em Portugal continental, foi realizado um levantamento malacológico em vários distritos, cujos resultados são apresentados no Capítulo 2. Os distritos em estudo foram Beja, Coimbra, Évora, Faro, Guarda, Lisboa, Portalegre, Setúbal e Viseu, tendo sido colhidos 3219 exemplares de P. metidjensis, enquanto para B. truncatus não foi encontrado nenhum exemplar. Por isso, a segunda parte do trabalho decorreu com exemplares de B. truncatus, mantidos há várias gerações no Laboratório de Malacologia da Unidade de Helmintologia e Malacologia Médicas, e tendo origem em exemplares colhidos pela Profª Doutora Maria Amélia Grácio, Directora da Unidade. Ainda neste capítulo e com base nos dados recolhidos, foi feita a caracterização dos habitats segundo o seu tipo físico, natureza e aspectos bioecológicos. No Capítulo 3, destaca-se a variabilidade encontrada nas características morfométricas da concha de P. metidjensis nos diferentes distritos, o que permitiu evidenciar dois grupos distintos. O primeiro engloba as regiões do Alentejo, Algarve e Estremadura e o segundo, as regiões das Beiras e Sado. O tipo físico dos habitats e as características das conchas dos moluscos colhidos parecem ser os factores explicativospara esta similaridade. Neste capítulo também é feita uma abordagem sobre a dinâmica populacional de quatro habitats seleccionados com base nas características físicas de cada um deles (dois do distrito de Évora e dois do distrito de Faro). No Capítulo 4, estudam-se os moluscos em relação a uma eventual infecção natural por tremátodes, bem como, a sua susceptibilidade à infecção por Schistosoma haematobium (estirpe de Angola) e S. mansoni (estirpe do Brasil). No total de 3219 P. metidjensis examinados, 1456 (45,2%) eliminaram xifideocercárias. Quanto à susceptibilidade de P. metidjensis a S. haematobium, os resultados vieram, mais uma vez, confirmar a não susceptibilidade desta espécie de moluscos à estirpe angolana de S. haematobium. Em relação a S. mansoni, alguns exemplares de P. metidjensis desenvolveram infecção até à fase de esporocisto, apesar de não chegarem a eliminar cercarias. Estes resultados não se verificaram nos moluscos B. truncatus. No Capítulo 5, é feito pela primeira vez, um estudo molecular de P. metidjensis. Neste estudo foram usados exemplares de P. metidjensis de diferentes habitats e agrupados em cinco distritos, para analisar a sua posição sistemática e relação filogenética com outras espécies homólogas cujas sequências se encontram no GenBak. Nesta análise foram usadas as sequências parciais dos genes mitocondriais COI e 16S, tendo-se identificado um total de nove haplotipos para o gene COI e quatro para o gene 16S. Estes resultados mostraram que o maior número de haplotipos foi encontrado no distrito de Coimbra, para ambos os genes, significando que os habitats deste distrito foram mais polimórficos que os restantes. Com base nos resultados obtidos para os genes COI e 16S, P. metidjensis de Portugal apresentaram uma elevada homologia (81%) com outras espécies de Planorbarius spp, bem como, com espécies de Biomphalaria spp das regiões Neotropical e Africana, hospedeiros intermediários de S. mansoni e de outros tremátodes. Para avaliar qual o grau de diversidade genética de P. metidjensis foram usados marcadores de RAPD nos moluscos colhidos em 19 habitats (de nove distritos). Os resultados evidenciaram não só uma elevada variabilidade genética, determinada pelo Índice de Shannon (Ho=0,4981),como também, uma alta diferenciação genética (Gst=0,238) inter e intrapopulacional (de acordo com os pressupostos de Wright, 1978). À semelhança do capítulo anterior, no Capítulo 6, faz-se pela primeira vez uma caracterização molecular de B. truncatus de Portugal. Como já foi referido anteriormente, não foi possível colher exemplares desta espécie durante o trabalho de campo, por isso este estudo realizou-se com as populações mantidas no laboratório. Os resultados do estudo, em que se aplicou a técnica de RAPD, evidenciaram uma elevada diferenciação genética entre as populações (Gst=0,28), assim como, uma elevada variabilidade genética intrapopulacional determinada pelo Índice Shannon (0,5294 ± 0,1787) a qual parece estar relacionada com o baixo número de migrantes. Foram também utilizados como marcadores moleculares o gene COI do ADN mitocondrial e ITS (Região Interna Transcrita) do ADN ribossomal para análise da posição sistemática e relação filogenética com outras espécies homólogas (hospedeiras intermediárias de Schistosoma spp) cujas sequências se encontram no GenBank, as quais evidenciaram homologia muito elevada com as espécies B. truncatus (Sudão) e B. tropicus. Além disso, foi identificado um total de sete haplotipos para a região ITS e nove para o gene COI, sendo a população de moluscos de Estói a que apresentou três haplotipos, enquanto as restantes populações apresentaram quatro haplotipos distintos. Os resultados globais para Fst foram muito baixos, sugerindo tratar-se de uma mesma população.