Study of the role of RAF-1 in MAPK signaling in thyroid cancer cells - Castro, Lisandra Marisa Flores (2014)
O cancro da tireóide é o tumor maligno mais comum do sistema endócrino, correspondendo a 94% dos cancros do sistema endócrino e a 66% das mortes de cancros de origem endócrina. Mutações nos genes BRAF e RAS e rearranjos do RET/PTC estão entre os eventos mais frequentes no cancro da tireóide. Estas mutações estão associadas com a ativação aberrante da via de sinalização MAPK-ERK e/ou a ativação da via PI3K. Num trabalho anterior, o nosso grupo demonstrou que a inibição do BRAF não altera os níveis das pERKs na TPC-1, uma linha celular de cancro papilar da tireóide (PTC) com o rearranjo RET/PTC1. Também se sugeriu que nas células TPC-1, o RAF-1 parece ser a molécula dominante, mas pouco se conhece acerca do papel do RAF-1 na regulação da sinalização MAPK-ERK nestas células. Deste modo, colocámos a hipótese de que o RAF-1 possa ser a molécula responsável pela sinalização RET/PTC1-MAPKERK e possa ser essencial para a sobrevivência destas células. No presente estudo, procurou-se avaliar o papel do RAF-1 na sinalização MAPK em células do cancro da tireóide com o rearranjo RET/PTC1 em comparação com células com mutações BRAF e RAS. Testamos as alterações fenotípicas induzidas pela inibição do RAF-1 e/ou inibição do BRAF por RNAi e induzidas pela inibição das via das MEK e da PI3K em células TPC-1 com rearranjo RET/PTC1, e comparamos com células C643 e 8505C com a mutação HRASG13R e a mutação BRAFV600E, respetivamente. Na linha celular TPC-1, a inibição do RAF-1 diminui a proliferação e aumenta a apoptose em maior extensão, comparativamente com a inibição do BRAF, embora nenhum efeito foi observado nos níveis da ativação das ERKs. Nas linhas celulares 8505C e C643 a inibição do RAF-1 não afeta significativamente a apoptose, a proliferação e a activação das ERK (com exceção da C643) em contraste com o que foi observado após inibição do BRAF, nestas células. Os nossos resultados mostram que, em linhas com mutações BRAF e RAS, o BRAF é o principal regulador da ativação das ERKs. Estes resultados apoiam a hipótese de que as células do cancro da tireóide com o rearranjo RET/PTC1 são mais dependentes de RAF-1 e menos dependentes da via de sinalização BRAF para a proliferação e apoptose, do que aquelas com ativação de mutações RAS ou BRAF. Foi também testado, um inibidor das MEKs (PD98059) e um inibidor do PI3K (LY294002) e pouco ou nenhum efeito foi verificado nos níveis de pERKs respetivamente sugerindo que a ativação das ERKs na TPC-1 é activada discretamente pela MEK e não regulada pelo PI3K. Mostramos também que, na linha celular TPC-1, a regulação da proliferação é mais dependente da sinalização PI3K-AKT em comparação com as vias RAF-1 e BRAF. Os nossos dados também sugerem que nas células TPC-1, o RET/PTC1 pode ativar as ERKs por um mecanismo independente do BRAF, RAF-1 e PI3K e da via MAPK-ERK clássica. Os nossos resultados suportam a hipótese principal de que as células do cancro da tireóide, TPC-1, podem ter um mecanismo alternativo de ativação das ERK, tais como mutações na via MAPK-ERK. A compreensão dos mecanismos subjacentes à ativação constitutiva das ERK em células de cancro da tireóide com o rearranjo RET/PTC1, pode levar a encontrar novas abordagens terapêuticas, de primordial importância para este tipo de cancro.