Recuperação de compostos bioativos da alga Fucus Vesiculosus por ultrafiltração/diafiltração e avaliação da ação biológica em doenças cardiovasculares
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Publication Date: | 2020 |
Format: | Master thesis |
Language: | por |
Source: | Repositórios Científicos de Acesso Aberto de Portugal (RCAAP) |
Download full: | http://hdl.handle.net/10400.21/12256 |
Summary: | Devido à crescente preocupação com as doenças cardiovasculares, estando apontadas como uma das principais causas de morte a nível mundial, e sabendo que a hipercolesterolemia é um fator de risco ao seu desenvolvimento, a implementação de um estilo de vida saudável é uma das medidas principais para prevenção e redução dos níveis de colesterol, sendo por vezes necessário a integração de alimentos funcionais a esta dieta de modo a potenciar a diminuição do colesterol. Neste trabalho, estudou-se a alga Fucus vesiculosus, que é um recurso abundante na costa portuguesa, pretendendo-se avaliar as suas atividades biológicas, e para além disto tentar entender quais os compostos bioativos responsáveis por essas atividades. De modo a enriquecer o extrato de F. vesiculosus em compostos bioativos, fez-se um fracionamento do mesmo, através da tecnologia de membranas usando membranas de ultrafiltração, operando em modo de diafiltração, na qual foram obtidas diferentes frações. Caracterizaram-se os extratos e as frações através da sua análise em cromatografia líquida de elevada resolução (HPLC-DAD), cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa (LC-MS), e foi ainda feita a determinação dos fenóis totais, dos taninos, das proteínas, dos glúcidos e do manitol. Relativamente às atividades biológicas, foram quantificadas a capacidade antioxidante, a inibição da acetilcolinesterase (AChE), da 3-hidroxi-3-metilglutarul coenzima A redutase (HMGR) e determinada a citotoxicidade em células do carcinoma humano hepatocelular (Hep-G2). Dos extratos estudados, o que demonstrou melhores resultados em termos de atividade foi o extrato da decocção a uma pressão de 2 bar (AD) obtendo-se uma concentração de extrato que origina 50% de atividade antioxidante de 0.447 mg extrato seco/mL solução, uma concentração de extrato que origina 50% inibição da AChE de 8.226 mg extrato seco/mL solução e da HMGR de 1.590 mg extrato seco/mL solução. Para as frações obtidas através da tecnologia de membranas, as frações que ganharam atividade biológica em relação ao extrato inicial, foram a do permeado da membrana de maior limite de exclusão molecular (MWCO), C35_P, e a do concentrado da membrana de menor MWCO (C25_C). Tendo em conta as pequenas diferenças observadas entre estas duas frações, optou-se por aprofundar o estudo na fração do permeado da membrana de maior MWCO (C35_P), para a qual se identificaram os componentes por LC-MS verificando-se um enriquecimento da fração em manitol e em derivados do floroglucinol, designados por florotaninos. Em termos da citotoxicidade tanto o extrato da decocção (AD) como o permeado da membrana de maior MWCO (C35_P) não demonstraram toxicidade para as células Hep-G2, apresentando mais de 100% de viabilidade celular para a maioria das concentrações estudadas. Concluiu-se que o extrato da F. vesiculosus, apresentou uma atividade antioxidante promissora, assim como a sua possível aplicação no tratamento/prevenção em doenças cardiovasculares e neurodegenerativas. |
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Devido à crescente preocupação com as doenças cardiovasculares, estando apontadas como uma das principais causas de morte a nível mundial, e sabendo que a hipercolesterolemia é um fator de risco ao seu desenvolvimento, a implementação de um estilo de vida saudável é uma das medidas principais para prevenção e redução dos níveis de colesterol, sendo por vezes necessário a integração de alimentos funcionais a esta dieta de modo a potenciar a diminuição do colesterol. Neste trabalho, estudou-se a alga Fucus vesiculosus, que é um recurso abundante na costa portuguesa, pretendendo-se avaliar as suas atividades biológicas, e para além disto tentar entender quais os compostos bioativos responsáveis por essas atividades. De modo a enriquecer o extrato de F. vesiculosus em compostos bioativos, fez-se um fracionamento do mesmo, através da tecnologia de membranas usando membranas de ultrafiltração, operando em modo de diafiltração, na qual foram obtidas diferentes frações. Caracterizaram-se os extratos e as frações através da sua análise em cromatografia líquida de elevada resolução (HPLC-DAD), cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massa (LC-MS), e foi ainda feita a determinação dos fenóis totais, dos taninos, das proteínas, dos glúcidos e do manitol. Relativamente às atividades biológicas, foram quantificadas a capacidade antioxidante, a inibição da acetilcolinesterase (AChE), da 3-hidroxi-3-metilglutarul coenzima A redutase (HMGR) e determinada a citotoxicidade em células do carcinoma humano hepatocelular (Hep-G2). Dos extratos estudados, o que demonstrou melhores resultados em termos de atividade foi o extrato da decocção a uma pressão de 2 bar (AD) obtendo-se uma concentração de extrato que origina 50% de atividade antioxidante de 0.447 mg extrato seco/mL solução, uma concentração de extrato que origina 50% inibição da AChE de 8.226 mg extrato seco/mL solução e da HMGR de 1.590 mg extrato seco/mL solução. Para as frações obtidas através da tecnologia de membranas, as frações que ganharam atividade biológica em relação ao extrato inicial, foram a do permeado da membrana de maior limite de exclusão molecular (MWCO), C35_P, e a do concentrado da membrana de menor MWCO (C25_C). Tendo em conta as pequenas diferenças observadas entre estas duas frações, optou-se por aprofundar o estudo na fração do permeado da membrana de maior MWCO (C35_P), para a qual se identificaram os componentes por LC-MS verificando-se um enriquecimento da fração em manitol e em derivados do floroglucinol, designados por florotaninos. Em termos da citotoxicidade tanto o extrato da decocção (AD) como o permeado da membrana de maior MWCO (C35_P) não demonstraram toxicidade para as células Hep-G2, apresentando mais de 100% de viabilidade celular para a maioria das concentrações estudadas. Concluiu-se que o extrato da F. vesiculosus, apresentou uma atividade antioxidante promissora, assim como a sua possível aplicação no tratamento/prevenção em doenças cardiovasculares e neurodegenerativas. |
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