Novas abordagens na pesquisa de alvos terapêuticos frente à infecção por Trypanosoma cruzi - Silva, Francisca Hildemagna Guedes da (2016)
A doença de Chagas (DC), endêmica em 21 países da América Latina, é a principal responsável por mortes no tocante a cardiopatias infecciosas. A terapia atual é insatisfatória devido à limitada atividade na fase crônica, alta toxicidade, e ocorrência de isolados naturalmente resistentes aos nitroderivados de referência. Nesse sentido, dentre os principais desafios a serem enfrentados destacam-se a padronização de modelos experimentais que possam melhor predizer a ação de novos candidatos terapêuticos, assim como a urgente identificação de novas terapias alternativas mais seletivas e promissoras. Estas temáticas, portanto, representaram o objeto da presente tese. Assim, nossos estudos in vitro e in vivo foram divididos em dois blocos. O primeiro explorando a interferência de diferentes modelos experimentais sobre a ação tripanocida de novos compostos e do medicamento de referência e no segundo bloco, investigando a eficácia (em esquemas de monoterapia e em combinação) de duas diferentes classes de compostos: (a) compostos heterocíclicos da classe das arilimidamidas (AIA), moléculas aromáticas que interagem com fenda menor do DNA e, (b) inibidores imidazólicos da biossíntese de esteróis (CYP51), como VNI e VFV. Dados in vitro revelaram que das AIAs estudadas, a 35DAP073 (derivado m-terfenil) foi a mais promissora exibindo atividade (EC50/24 h) na faixa de 40 nM e índice de seletividade (IS) de 480 Esta AIA foi ainda capaz de estimular a gênese de corpúsculos lipídicos embora não tenhamos observado correlação entre este achado e ação tripanocida. 35DAP073 (5-20 mg/kg/dia, via intraperitoneal) reduziu de modo dose-dependente (46- 96%) a parasitemia quando administrada por dois dias (uma dose na positivação e a outra no pico da parasitemia). Apesar de suprimir completamente a infecção e conferir 100% sobrevida dos animais, a dose de 10 mg/kg/dia 35DAP073 levou a efeitos neurológicos reversíveis após 10 dias de administração. Os estudos in vitro com o imidazol VFV também revelaram forte ação sobre formas intracelulares (EC50/48h 380 nM e IS >263), baixa toxicidade em modelos de toxicidade aguda (NOAEL 200 mg/kg) sendo capaz de suprimir completamente a parasitemia e prover 100% sobrevida em doses de 25 mg/kg (via oral, duas vezes ao dia). Porem ambos compostos (35DAP073 e VFV) não revelaram índices de cura parasitológica quando testados em sistemas de monoterapia. Nossos resultados revelam ainda importantes diferenças relacionadas ao curso da infecção e impacto da terapia experimental a depender do: (a) gênero do animal, (b) início da administração do composto teste e o seu tempo de tratamento, além da (c) natureza do veículo utilizado para diluir o mesmo. De modo geral, fêmeas são menos vulneráveis que machos à infecção pelo T. cruzi e mais sensíveis a terapia, a maior solubilidade de um composto resulta na sua melhor biodisponibilidade e potencial sucesso terapêutico, e o tratamento 24 h após infecção (esquema preventivo) resulta em maiores índices de redução de parasitismo, porém é menos preditivo por exibirem uma fraca correlação com as condições reais de infecção humana. Outro importante aspecto refere-se ao uso de protocolos de imunossupressão pós-terapia visando promover a sensibilidade da detecção do parasito por microscopia ótica e/ou PCR. O uso da terapia combinada corroborou dados da literatura sobre aumento da potência de tratamentos quando se atinge distintos alvos pelo uso de associação de distintos agentes, permitindo ainda redução de doses e tempos de exposição, menor toxicidade, além de prevenir ocorrência de resistência a fármacos. Nossos dados revelaram importantes reduções na carga parasitária (Bz + 35DAP073) e mesmo no aumento nos níveis de cura parasitológica (Bz + VFV) utilizando terapia combinada.