Isolamento, seleção e preservação de fungos produtores de pectinases - Lopes-Shikida, Sonia Aparecida Reis (1995)
O presente trabalho foi realizado como parte de uma linha de pesquisa desenvolvida no agrupamento de biotecnologia, Divisão de química-IPT, visando basicamente o isolamento e seleção de linhagens fúngicas melhores produtoras de enzimas Pepctinolíticas bem como a preservação adequada de tais linhagens. O complexo enzimático em foco neste trabalho é composto por enzimas que degradam substâncias pécticas. As enzimas pectinolíticas são produzidas por vários microrganismos. Entretanto, para fins industriais, somente os de origem fúngica são utilizados. Tais enzimas têm sido largamente empregadas na indústria de processamento de frutas para maceração de polpas, extração e clarificação de sucos e vinhos. Linhagens interessantes do ponto de vista industrial nem sempre são encontradas a disposição em coleções de cultura, tomando-se premente o desenvolvimento de trabalhos que visem a busca de novos isolados com características satisfatórias para a produção do metabólito de interesse. Assim sendo, á também essencial que as linhagens promissoras encontradas sejam mantidas adequadamente para preservação de suas importantes características originais, justificando-se dessa forma o presente estudo. Para obtenção de novos isolados da natureza, utilizou-se técnicas microbiológicas básicas de isolamento. Na seleção utilizou-se testes semiquantitativos (meio sólido) e quantitativos (meio líquido). Os testes aplicados refletiram em algumas distorções, que podem ser peculiares a cada método. Através destes foi possível selecionar a linhagem FP/83 posteriormente classificada como Trichoderma harzianum Rifai, que produz 2,5 vezes mais enzima que a linhagem padrão utilizada, FP/107 de Aspergilus orysae. Mutantes morfológicos provenientes da linhagem FP/83 foram obtidos através da indução de seus conídios com luz ultravioleta. Para seleção dos mutantes encontrados utilizou-se apenas do teste quantitativo (meio de cultura líquido). Dentre estes, o mutante 1/4 demonstrou sua superioridade quanto a produção de pectinases, sendo aproximadamente 2,5 vezes melhor que seu parental (FP/83) e cerca de 5,0 vezes a linhagem padrão (FP/107). Os métodos de preservação, como liofilização e criopreservação em nitrogênio líquido, aplicados para as linhagens selecionadas demonstraram-se bastante adequados, refletindo-se na manutenção da viabilidade celular a níveis bastantes elevados para a maioria das linhagens.