Análise da variação na concentração dos ácidos clorogênicos diante de diferentes tratamentos pós-coleta - Moreira, Eduarda Antunes (2017)
Considerando que diversas atividades biológicas dos ácidos clorogênicos já foram descritas na literatura, uma melhor compreensão da biossíntese e do acúmulo desses polifenois nas plantas está diretamente vinculada aos parâmetros de qualidade de fitoterápicos. Este trabalho teve o objetivo de monitorar a variação na concentração de metabólitos secundários do grupo dos ácidos clorogênicos no tecido foliar de diversas espécies diante de diferentes tratamentos pós-coleta. Este monitoramento foi realizado através da quantificação das substâncias por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas em sequência (CLUE-EM/EM). Na primeira fase do estudo, foram coletadas folhas de cada espécie selecionada para o estudo (Caju - Anacardium occidentale L.; Graviola - Annona muricata L.; Pata-de-Vaca - Bauhinia variegata L.; Limão - Citrus limon (L.) Burm. f.; Café - Coffea arabica L.; Pitanga - Eugenia uniflora L.; Alecrim - Rosmarinus officinalis L., e Jambolão - Syzygium cumini (L.) Skeels). As folhas foram submetidas a um processo de extração e os extratos obtidos foram analisados por CLAE-EM/EM. Foram encontradas nove substâncias monossubstituídas nas posições 3, 4 e 5 pertencentes aos subgrupos dos ácidos p-cumaroilquínicos, cafeoilquínicos e feruloilquínicos dos ácidos clorogênicos, além de ácidos dicafeoilquínicos. A identificação dos sinais cromatográficos foi realizada por meio dos padrões de fragmentação de cada composto. Na segunda fase do estudo, foram coletadas quatro folhas dos indivíduos em estudo. As folhas foram congeladas em nitrogênio líquido (para interrupção do metabolismo) em tempos diferentes: imediatamente após a coleta (T0), 30 min após a coleta (T0,5), 1 h após a coleta (T1) e 2 h após a coleta (T2). Este procedimento foi realizado uma vez por mês durante seis meses. Em outro momento foram retiradas seis folhas de três indivíduos de espécies selecionadas (Alecrim, Pitanga, Pata-de-Vaca, Limão e Café) e cada folha foi congelada nos tempos T0 (imediatamente após a coleta), T6 (6 h após a coleta), T12 (12 h após a coleta), T24 (24 h após a coleta), T48 (48 h após a coleta) e Ts (após secagem das folhas - aproximadamente 30 dias após a coleta). O material coletado foi extraído e analisado por CLUE-EM/EM, no modo MRM. O método analítico quantitativo foi validado, considerando os parâmetros de linearidade, exatidão e precisão. As concentrações dos ácidos clorogênicos em estudo não apresentaram um padrão de variação que se relacione com os tempos de tratamento ou um aumento linear nas respostas dentro do intervalo de 2 h após o início do catabolismo do tecido. As amostras com tempos de tratamento mais longo, por sua vez, apresentaram aumento significativo de diversos compostos nas folhas que não tiveram seu metabolismo interrompido 30 dias após a coleta. Este acúmulo de ácidos clorogênicos corrobora a hipótese de que o aumento da concentração destes compostos pode estar relacionado ao catabolismo de polímeros fenólicos de maior massa.