Determinação de humulonas e lupulonas em lúpulo por microextração em fase líquida com fibra oca e cromatografia líquida de alta eficiência - Silva, Lucas Mari (2020)
O lúpulo (Humulus Lupulus) apresenta resinas amargas ricas em humulonas e lupulonas (α-ácidos e β-ácidos, respectivamente), que são compostos responsáveis pelo amargor, pelo equilíbrio do sabor e pela sensação de saciedade que a cerveja proporciona. Desta forma, a quantificação de humulonas e lupulonas em lúpulo é fundamental para se estabelecer o preço de comercialização do lúpulo, para se escolher e calcular a quantidade correta de lúpulo que será utilizado em uma receita cervejeira e para manter o padrão de qualidade do aroma e sabor entre os diferentes lotes de produção cervejeira. As metodologias oficiais para quantificação de humulonas e lupulonas em lúpulo utilizam cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD) após o preparo de amostra, empregando solventes como, éter dietílico, metanol, tolueno ou iso-octano. Em função disso, em um laboratório de controle de qualidade de lúpulo são gerados 360 mL de resíduo de solventes apenas na etapa de extração, para cada amostra avaliada. O objetivo geral desta pesquisa foi desenvolver, otimizar e validar uma metodologia analítica empregando microextração em fase liquida com fibra oca (HF-LPME) e HPLC-DAD para determinação de humulonas e lupulonas em lúpulo. Para isso, foi realizada a otimização multivariada da extração das humulonas e lupulonas do lúpulo através do uso da ferramenta estatística de delineamento composto central. Esta otimização permitiu conhecer as condições ótimas para a etapa de extração de humulonas e lupulonas em lúpulo. As condições ótimas de extração empregando 20 µL de ciclohexano como solvente de extração e 60 mg de amostra foram: tempo de extração de 32 minutos, agitação de 700 rpm, pH 7 e 0,025 g NaCl. A metodologia foi validada segundo os requisitos da Agência Nacional de Vigilância sanitária – ANVISA de acordo com a resolução da diretoria colegiada - RDC Nº 166, de 24 de julho de 2017. O método apresentou linearidade, exatidão e precisão aceitáveis e os limites de detecção e quantificação foram adequados. O método aqui descrito mostrou-se apropriado para determinar os compostos estudados em lúpulo, sendo suficientemente sensível para quantificá-los em amostras comerciais, reforçando a grande versatilidade da técnica de HF-LPME no preparo de amostras para análise em matrizes complexas como é o caso do lúpulo.