Diagnóstico da infecção de Biomphalaria glabrata por Schistosoma mansoni em área de baixa endemicidade no Estado de São Paulo, utilizando técnicas de biologia molecular - Casotti, Marcia Oliveira (2019)
Aproximadamente 240 milhões de pessoas no mundo estão infectadas pelo Schistosoma mansoni (S. mansoni). No Brasil, os principais objetivos do programa de controle da esquistossomose são os de reduzir a infecção humana em áreas endêmicas, e de conter sua expansão. O principal hospedeiro intermediário deste parasita é o caramujo Biomphalaria glabrata (B. glabrata). O diagnóstico convencional da infecção por S. mansoni em Biomphalaria feito rotineiramente é ineficaz mediante algumas condições. Assim, o objetivo desse estudo foi desenvolver e padronizar técnicas moleculares sensíveis e específicas para detectar a infecção por S. mansoni em caramujos B. glabrata procedentes de uma área de baixa endemicidade (Ourinhos/SP). Moluscos de Ourinhos/SP foram adequadamente transportados para o Laboratório de Imunopatologia da Esquistossomose da Universidade de São Paulo (LIM-06), que já mantinha rotineiramente moluscos B. glabrata, linhagem BH. Foram testados protocolos da Reação em Cadeia da Polimerase convencional (cPCR) e TaqMan®Reação em Cadeia da Polimerase (TaqMan®qPCR) para o diagnóstico da infecção no molusco. Dois grupos com 10 caramujos por linhagem (BH e Ourinhos) foram expostos a crescentes cargas parasitárias (1, 5, 10, 20, 30 miracídios) de S. mansoni (BH) e avaliados em dois períodos diferentes do ciclo assexuado: 72 horas e 14 dias após exposição. A extração de DNA de S. mansoni (BH) foi realizada em tecido da região cefalopodal dos caramujos utilizando o QiAmp®DNA MiniKit (Qiagen). O DNA extraído foi quantificado em Nanodrop®. Para amplificação, utilizou-se três primers sendo as sequências 28S do DNAr (cPCR), COX 1 do DNAmt e sequência de repetição em tandem (TaqMan®qPCR). A visualização dos produtos de amplificação do DNA na cPCR foi feita em gel de agarose 2%, na TaqMan®qPCR os dados foram interpretados com valores expressos em Ct (Cycle Threshold). Realizou-se a inoculação de hamsters com cercárias oriundas de B. glabrata (Ourinhos/SP) infectados com miracídios BH. Observamos os seguintes resultados: implantação da linhagem laboratorial de B. glabrata (Ourinhos/SP); Presença de bandas nítidas com 350 pb na reação de cPCR, além de produtos de amplificação do DNA de S. mansoni na TaqMan®qPCR expressos em Ct (Cycle Threshold). Essa positividade foi observada em ambos os períodos pós-exposição nos dois métodos moleculares empregados. A presença de alterações anatomopatológicas no hamster infectado, demonstra a capacidade que esse molusco tem de completar seu ciclo infeccioso. Os resultados demonstram que, mesmo em condições de restrição experimental, esse molusco foi capaz de se reproduzir e manter um novo ciclo laboratorial de uma nova linhagem B. glabrata (Ourinhos/SP). Além disso, as técnicas moleculares foram sensíveis na detecção do DNA dos moluscos Ourinhos infectados pelo S. mansoni cepa BH. Portanto, é um estudo que poderá promover o monitoramento e a gestão das coleções hídricas nas áreas de baixa endemicidade melhorando o impacto dessa parasitose na qualidade de vida dessas populações