Estabelecimento de protocolo de cultura de tecidos de Sorghum bicolor - Hosaka, Guilherme Kenichi (2014)
O sorgo é uma planta monocotiledônea diplóide com ciclo de vida de aproximadamente quatro meses. Apresenta grande relevância na agricultura pela sua utilização tanto para a alimentação humana e de animais quanto para a produção de biocombustíveis. Recentemente, o sorgo também surge como um forte candidato como planta modelo em estudos genômicos e fisiológicos relacionados com parede celular de gramíneas C4. Porém, para a análise da função de genes nesta espécie é essencial o estabelecimento da tecnologia de transformação genética que por sua vez depende de um eficiente método de regeneração de plantas. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo estabelecer um protocolo de cultura de tecidos utilizando discos de folhas e embriões imaturos como explantes, de modo a avaliar a redução do nível de oxidação na cultura in vitro pelo uso de antioxidantes e determinar as concentrações de reguladores vegetais para indução de embriogênese somática e regeneração de plantas. Em discos de folhas, os antioxidantes, PVP, ácido ascórbico e ác. cítrico foram testados na manipulação dos explantes até a inoculação em meio de cultura, porém não houve redução no nível de oxidação. Foram testados diferentes concentrações de 2,4-D para indução de calos e o uso de 1 mg L-1 e 2 mg L-1 apresentaram melhores respostas em embriogênese somática. Diferentes meios de cultura foram testados para obtenção de regeneração de plantas, mas a eficiência chegou somente a 1% de plantas a partir de discos de folhas. Em embriões imaturos, além dos antioxidantes PVP e ácido ascórbico, foram testados também os aminoácidos asparagina e prolina em meio de indução de calos. O uso de 2 g L-1 de asparagina e 3 g L-1 de prolina no meio de indução de calos e 3 mg L-1 de TDZ no meio de regeneração de plantas aumentou a eficiência de obtenção de plantas para até 15%. Assim, o uso de embriões imaturos foi considerado o explante mais promissor para a cultura de tecidos de sorgo. Devido aos altos níveis de oxidação e a baixa eficiência de regeneração de plantas em cultura de tecidos, foi testado o método de transformação genética via Agrobacterium tumefaciens conhecido como \"Floral dip\". Esta técnica não necessita da etapa de regeneração de plantas in vitro. Inicialmente, resultados promissores foram obtidos, porém há a necessidade do aprimoramento da metodologia.