Efeito da 5-bromodesoxiuridina sobre o desenvolvimento dos pufes de DNA dos cromossomos politênicos da região anterior da glândula salivar de Bradysia hygida (Diptera, Sciaridae) - Almeida, Jorge Cury de (1978)
1. A injeção de solução de BrdUrd, de concentração igual ou inferior a 8 mM, em larvas de Bradysia hygida em idade correspondente ao padrão m3 de manchas oculares (24 a 16 horas antes de m7), não lhes diminui mais do que a injeção de água a capacidade de produzir imagos de aparência normal. 2. Uma única injeção de 1 microlitro de solução de BrdUrd, de concentração entre 4 e 8 mM, administrada 18 a 10 horas antes de m7, impede a expansão dos pufes de DNA dos cromossomos politênicos da região anterior da glândula salivar. Os primórdios de tais pufes ficam compactados de modo típico. Se o tratamento é feito entre 24 e 18 horas antes de m7, a abertura dos pufes de DNA é menos afetada e, se o análogo é administrado 24 horas antes de m7, ou mais cedo, a expansão desses pufes parece normal. Administrado cerca de 4 horas antes de m7, o análogo não acarreta total compactação dos primórdios dos pufes de DNA do primeiro grupo, mas, ainda exerce seu efeito típico sobre os pufes de DNA do segundo grupo. Quando o análogo é ministrado cerca de 1 hora antes de m7, todos os pufes de DNA se mostram capazes de expandir-se. 3. Os pufes de RNA que ocorrem durante o período estudado (cerca de 16 horas antes de m7 a 16 horas depois de m7) parecem não sofrer alteração. 4. A compactação dos primórdios dos pufes de DNA pela BrdUrd deixa de ocorrer se a mesma é administrada em presença de timidina em igual concentração. Embora os pufes de DNA que se formam sejam menores, dada a moderada inibição da síntese de DNA imposta por qualquer desses nucleosídeos, seu aspecto parece normal e contrasta fortemente com o dos primórdios compactados produzidos pela injeção de BrdUrd sozinha. Se administrada 4 horas antes de m7, para produzir a compactação dos primórdios dos pufes do segundo grupo, mas, em companhia de hidroxiuréia, os pufes do segundo grupo expandem-se, com aspecto normal, embora menores. Esses resultados indicam que o efeito da BrdUrd depende de que haja síntese de DNA e sugerem que para exercer o efeito aqui descrito, o análogo tenha de ser incorporado no DNA dos primórdios. 5. O efeito da BrdUrd e da timidina sobre a síntese de DNA na glândula salivar foi avaliado por radiometria após incorporação de desoxicitidina tritiada. Em tempos curtos, de 15 minutos até 2 horas, a timidina deprime mais fortemente tal incorporação do que a BrdUrd. Em tempos mais longos, de 4 a 10 horas depois da injeção, os dois nucleosídeos a deprimem em grau semelhante. Essas observações corroboram a conclusão de que o efeito da BrdUrd não é atribuível simplesmente à moderada inibição que exerce sobre a síntese global de DNA, já que a timidina, embora nisso mais eficaz, resulta em pufes de DNA de aspecto normal, ainda que menores que os normais. (A hidroxiuréia e o imidazopirazol, inibidores da síntese de DNA, também exercem esse efeito se administrados em condições compatíveis com inibição apenas parcial da síntese de DNA durante a fase de desenvolvimento dos primórdios dos pufes de DNA). 6. A incorporação de uridina tritiada (avaliada por auto-radiografia) nos segmentos cromossômicos formadores de pufes de DNA é preferencialmente diminuída quando a BrdUrd exerce seu efeito típico sobre os primórdios desses pufes. Também é preferencialmente diminuída a incorporação de desoxicitidina tritiada. lsso mostra que o tratamento com BrdUrd afeta os primórdios não somente na capacidade de expandir-se e de sintetizar RNA, mas, também, na capacidade de sintetizar DNA adicional. 7. O sistema aqui descrito constitui a primeira evidência citológica patente a confirmar a hipótese de que a incorporação de BrdUrd em células eucarióticas pode levar a compactações localizadas da cromatina e oferece interessantes possibilidades para o estudo das propriedades da cromatina que se com pacta pela presença de BrdUrd em seu DNA, assim como para o estudo do significado funcional dos pufes de DNA.