Contribuição ao estudo do icetatato-14C como precursor de aminoácidos em folhas destacadas de café (Coffea arábica L cultivar mundo novo) - Brasil, Oswaldo Galvão (1976)
O presente trabalho teve como objetivo estudar o acetato icetatato-14C como precursor de aminoácidos em folhas destacadas de café (Coffea arábica cv. Mundo Novo) originárias de plântulas com quatro pares de folhas definitivas. Lotes de 1,5 grama de folhas foram incubadas com 10 µCi de acetato-1-14C com 10 µCi de acetato-2-14C na ausência de luminosidade. A interrupção da incubação foi feita com HC1 2N nos tempos de 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 e 180 minutos. O CO2 libertado durante os tempos de incubação foi retido em discos, de papel de filtro embebido em hiamina para posterior detecção da radioatividade. O material colhido nos diversos tempos foi homogeneizado em etanol 80% em ebulição. Esse homogeneizado forneceu duas frações, uma solúvel e outra insolúvel em álcool 80%. A fração solúvel, após cromatografia de troca iônica com resinas Dowex 50 x 8 H+ e Dowex 1 x 8 C1- originou as frações aminoácidos livres ácidos orgânicos e açúcares. A fração insolúvel foi tratada com éter etílico separando os lipídeos. O tratamento da mesma fração com hidróxido de sódio 0,5N separou proteínas, a qual por hidrólise ácida forneceu os aminoácidos proteicos. O material resultante dessas extrações constituiu o resíduo seco final. Treze aminoácidos foram separados por cromatografia bidimensional em papel de filtro: ácido aspártico, ácido glutâmico, serina, glicina, treonina, alanina, tirosina, arginina, valina, metionina, leucina, fenil-alanina e prolina. A radioatividade dos aminoácidos foi determinada pela eluição dos mesmos de um cromatograma e posterior detecção em cintilador para amostras liquidas da Nuclear Chicago. Pelos resultados obtidos podemos concluir que acetato-14C foi metabolizado por Folhas destacadas de café. Tanto acetato-1-14C como acetato-2-14C forneceram esqueleto carbônico para os principais compostos do metabolismo celular, tais como, açucares, ácidos orgânicos, lipídeos, proteínas e aminoácidos. O aparecimento desses compostos marcados indicou que o acetato, na sua forma ativada está relacionado com os processos de síntese da folha. A alta atividade especifica encontrada em ácidos orgânicos e CO2 mostrou que, conjuntamente com os processos de síntese, ocorreu uma utilização do acetato para produção de energia via ciclo de Krebs. A utilização do acetato via ciclo de Krebs e sua possível utilização no reverso da glicólise para produção de glicose e celulose, possibilitou a marcação de substratos que são vias de síntese de aminoácidos. Pode-se concluir pelos resultados que a molécula do acetato contribuiu para a formação das moléculas dos aminoácidos, sendo o carbono metílico mais incorporado que o carbono carboxílico.