Análise dos mecanismos antitumorais de FTY720 em linhagens humanas de carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço - Santos, Leandro Figueiredo dos (2018)
O FTY720 foi considerado um agente antitumoral contra vários tipos de câncer na promoção da morte celular, diminuição da proliferação, angiogênese e metástase; no carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço (CECP), ainda não foi descrito sua ação em todas as vias ativadas ou inibidas por este composto. O objetivo deste estudo foi avaliar a ação do FTY720 em modelo in vitro (cultura celular) e in vivo (camundongos) de CECP. Analisamos a atividade da PP2A, uma fosfatase antitumoral inibida em CECP, em um painel de linhagens de células de CECP, além de avaliar o tratamento com FTY720 nestas células e eleger duas linhagens para os posteriores experimentos. As células HN12 e SCC9 foram selecionadas para os estudos de mecanismo baseados nos menores níveis de atividade da PP2A sendo posteriormente incubadas com FTY720 e tendo as principais proteínas alvo analisadas por Westernblotting. Determinamos a viabilidade celular por citometria de fluxo, e estudos funcionais de sinalização de morte celular foram realizados utilizando-se inibidores de caspases/apoptose (Q-VD-OPh), necroptose (Necrostatina-1) e autofagia (3-metiladenina). A degradação de proteínas foi analisada com o inibidor de proteassoma MG132. A formação de tumor de xenoenxerto em camundongos Balb/c Nude foi utilizada, com a linhagem HN12, para avaliar o efeito de FTY720 in vivo. Como esperado, FTY720 aumentou as atividades de fosfatases em células CECP, incluindo PP2A, diminuiu os níveis de proteína SphK1 e ativou caspase-8 e -3 em ambas as células, bem como aumentou a lactato desidrogenase, que é marcador de necrose quando presente no meio extracelular. O bloqueio da apoptose recuperou a viabilidade celular enquanto a inibição da necroptose não afetou a morte celular promovida por FTY720. Por outro lado, a inibição da autofagia aumentou drasticamente a morte celular promovida pelo FTY720 in vitro, sugerindo autofagia como uma resposta protetora. In vivo, foi confirmado que a combinação de FTY720 com inibidor de autofagia (3-MA) reduz a formação do tumor xenoenxerto (HN12) em camundongos combinado ao aumento de ceramidas no sangue dos animais. Nós evidenciamos o FTY720, pelo seus efeitos antitumorais sinérgicos com inibidor de autofagia, como potencial estratégia antitumoral em CECP e talvez outros tipos de câncer, assim como os níveis de ceramidas no sangue como potencial marcador de resposta terapêutica