Metabólitos da 15-lipoxigenase influenciam crescimento, migração e potencial invasivo de células de glioblastoma. - Ferreira, Matthew Thomas (2019)
Introdução e Objetivos: Compreender a interação entre cânceres extremamente agressivos, como o glioblastoma (GBM), e o metabolismo dos ácidos graxos poderia contribuir para a melhora de terapias anti-tumorais. A 15-lipoxigenase-1 (15-LOX-1), uma enzima que metaboliza o ácido linoleico (LA) e o ácido araquidônico (AA), induz efeitos pró ou anti-tumorigênicos em diferentes tipos de câncer. Seu papel no GBM ainda não foi claramente descrito. O objetivo deste estudo foi descrever a influência da 15-LOX e seus metabólitos no crescimento, migração e potencial invasivo de células de GBM. Delineamento Experimental: Duas linhagens celulares de GBM foram cultivadas e tratadas in vitro com metabólitos da 15-LOX (Ácido 13(S)-Hidroxioctadecadienoico (13-HODE), 9-HODE e Ácido 15(S)-Hidroxieicosatetraenoico (15-HETE)) e/ou inibidores de 15-LOX (LUT e NDGA). Curvas de viabilidade com MTT (HODEs [0,1-1M]) e curvas de dose-resposta (HODEs [1-10 &#181 M]; LUT [7,5-15 &#181M]; NDGA [20-40 &#181M]) foram realizadas por 24h, 48h, 72h. Em seguida, foram realizados RT-PCR convencional e/ou quantitativo das células (RNAms de 15-LOX e seus correspondentes downstream: PPARs, GPR132, MMPs). Os ensaios de fechamento de ferida foram realizados após 12 horas de tratamento (HODEs [5 &#181M]; LUT [15 &#181M]; NDGA [40&#181M]) para avaliar a migração. Em seguida, foram realizadas zimografias em gelatina (10mg/mL) e western blot (40g de proteína/amostra) para identificar a influência desses metabólitos e inibidores no potencial invasivo do GBM (definida aqui como a presença/atividade das MMPs). Resultados e Discussão: A via de 15-LOX está presente e ativa nas linhas celulares de GBM. 13-HODE [5 &#181M] e 9-HODE [5-10 &#181M] aumentaram a contagem de células em U87MG (n = 3). Inibidores de 13-HODE e 15-LOX-1, LUT [15 &#181M] e NDGA [40&#181M], diminuíram a migração na linhagem celular T98G, e NDGA reduziu a atividade de MMP2 e aumentou a forma latente de MMP2. Os tratamentos com 13-HODE / 9-HODE aumentam o RNAm de MMP2 em T98G e U87-MG, respectivamente. Todos os dados foram plotados e analisados usando o GraphPad Prism 5.0. A análise entre dois grupos foi realizada com o teste T de Student, e a ANOVA de duas vias com pós-teste de Bonferroni foi usado para comparar mais de dois grupos de dados. As diferenças foram consideradas estatisticamente significativas quando p< 0,05. Conclusões e Perspectivas: 13-HODE e 9-HODE influenciam o crescimento de células de GBM, 13-HODE e 15-LOX inibiram a migração, e 13-HODE/9-HODE aumentaram o potencial invasivo, enquanto a inibição de 15-LOX diminuiu o potencial invasivo. 15-LOX e seus metabólitos derivados de LA exercem uma influência pró-tumorigênica sobre as células de GBM in vitro. Novos estudos esclarecerão se essas relações se correlacionam positivamente com a malignidade.