Produção de dextranas e aspectos da biologia molecular de Leuconostoc mesenteroides - Campos, Maria Helena Santini (1992)
A tecnologia da produção de dextrana desenvolveu-se com uma única linhagem de Leuconostoc mesenteroides (B-512f). dando-se ênfase aos estudos de propriedades fisico-quimicas do produto e à atividade da dextrana-sacarase. No presente trabalho estudaram-se aspectos da biologia molecular da espécie, seleção de linhagens, avaliação da produção de dextrana de parâmetros da fermentação aeróbia. Foi possível desenvolver metodologias para extração de DNA genômica e plasmidial investigar quanto a métodos de transferência de material genético, identificar e mapear plasmídios, bem como caracterizar linhagens de interesse quanto a marcas de resistência a antibióticos. As linhagens MH4.1, MH8.1, MH8.2, L2 e Z2, foram identificadas como linhagens produtoras de dextrana através de meio seletivo desenvolvido para esta finalidade. Através de processo de fermentação com recirculação do meio liquido, para seu arejamento continuo, em protótipo de fermentador, conseguiu-se otimizar a produção nesta escala, superando-se valores registrados na literatura como elevados. A eficiência de extração e purificação de DNA obtidas neste trabalho, bem como do meio de crescimento especial, possibilitam obter preparações de DNA genômico ou plasmidial em quantidades adequadas a estudos moleculares, clonagem e transformação de L. mesenteroides, efetuar transferência de genes para outras espécies, bem como isolar destas, genes para a transformação de L. mesenteroides. A linhagem MH4.1 possui dois plasmídios de tamanhos 52 kb e 2,1kb. O plasmídio 52 kb foi mapeado e nele identificado o gene de resistência a tetraciclina. Fragmentos deste plasmídio foram circularizados e engenheirados para a construção de um vetor plasmidial bifuncional com características apropriadas à transformação, incluindo-se marca seletiva e origem de replicação L. mesenteroides e E. Coli