Obesidade canina e inflamação: estudo dos microRNAs envolvidos com a expressão de macrófagos no tecido adiposo - Nunes, Paola Caroline da Silva (2022)
O tecido adiposo é um órgão metabólico e endócrino, tendo seus adipócitos a capacidade de sintetizar e secretar vesículas extracelulares (VEs), permitindo assim a comunicação intercelular. Os microRNAs (miRNAs), presentes no tecido adiposo e nas VEs circulantes, são capazes de regular a expressão gênica. Esse estudo teve como objetivo avaliar as VEs pequenas no soro de cães obesos, além de: 1) investigar a influência da perda de peso sobre o tamanho e concentração dessas vesículas; 2) avaliar a expressão de três miRNAs alvo em VEs pequenas de cadelas obesas; e 3) analisar marcadores de inflamação e uma possível relação entre o estado inflamatório, as VEs séricas e os miRNAs alvos expressos nas VEs séricas e no tecido adiposo de cadelas obesas. O segundo capítulo, demonstrou que as VEs pequenas foram isoladas a partir do sangue total, por meio de centrifugações e ultracentrifugações seriadas, utilizando o equipamento NanoSight para a determinação do tamanho e concentração dessas VEs pequenas presentes no soro de cães com sobrepeso e obesos, antes e após o programa de perda de peso. A redução do peso corporal e do acúmulo de gordura nesses cães, foi acompanhada pela diminuição do tamanho e da concentração das VEs pequenas, sugerindo assim uma redução da atividade secretora do tecido adiposo dos cães, após 4 meses do programa de perda de peso. No terceiro capítulo foi avaliado o tamanho e a concentração de VEs séricas em cadelas obesas, assim como os miRNAs (miR-132, miR-26b e miR-155) contidos nessas VEs. Os miRNAs foram extraídos das VEs pequenas e analisados pela técnica de PCR em tempo real. Uma análise de componentes principais demonstrou que um grupo de cadelas obesas (obeso com alteração) se agrupavam com relação à concentração de VEs pequenas e concentração sérica de triglicérides. Essas cadelas apresentaram maior concentração sérica de triglicérides, maior concentração de VEs pequenas e maior expressão do miR-132 e miR-26b, sugerindo que com a expansão do tecido adiposo, provocada pela obesidade, está ocorrendo maior produção e liberação de VEs, o que provavelmente está influenciando a comunicação intercelular devido à ação da expressão dos miRNAs contidos nessas VEs pequenas, pois os mesmos parecem estarem envolvidos com metabolismo de lipídios e adipogênese. Finalmente no quarto capítulo, foi avaliado o miR-26b, miR-155 e miR-132 e seus genes alvo (MYCBP, SOCS1 e FOXO3), com o infiltrado de macrófagos e a inflamação no tecido adiposo subcutâneo de cadelas obesas, em comparação com cadelas controle. Os miRNAs foram extraídos das VEs pequenas e do tecido adiposo e analisados pela técnica de PCR em tempo real. A análise da expressão dos genes também foi realizada com a técnica de PCR em tempo real. Nenhuma diferença foi observada em relação aos marcadores de inflamação, infiltrado de macrófagos no tecido adiposo subcutâneo, concentração e tamanho das VEs séricas, expressão dos miRNAs nas VEs e no tecido adiposo subcutâneo e expressão dos genes alvos dos miRNAs no tecido adiposo subcutâneo. Entretanto, observamos que as cadelas obesas apresentaram hipertrofia do tecido adiposo subcutâneo revelando uma alteração na homeostasia desse tecido. Não foram encontradas evidências que comprovassem que o processo inflamatório estava instalado e provavelmente por isso não encontramos alterações nos miRNAs e nos genes alvo avaliados, assim como o número de infiltrado de macrófagos no tecido adiposo subcutâneo. Em suma, esses resultados contribuem para o campo de pesquisa da obesidade canina, visando elucidar o papel das VEs pequenas e de seus miRNAs nessa doença.