Avaliação da resposta policlonal e produção de anticorpos monoclonais a partir de linfócitos B isolados de pacientes infectados pelo vírus da Dengue. - Souza, Higo Fernando Santos (2019)
Acredita-se que a presença de anticorpos com reação cruzada em uma segunda infecção pelo vírus da dengue seja responsável pelo agravamento da doença. No entanto, ainda há várias controvérsias na literatura no que se refere ao papel dos anticorpos na neutralização da infecção viral e/ou no agravamento da doença. Para melhor estudar as propriedades neutralizantes e/ou patológicas dos anticorpos gerados naturalmente durante a infecção pelo vírus da dengue, o presente projeto tem por objetivo avaliar a resposta policlonal e produzir anticorpos monoclonais a partir de células B isolados de pacientes infectados pelo vírus da dengue. Para isso, os genes que codificam para as porções variáveis das cadeias leve e pesada de suas imunoglobulinas foram clonados em vetores de expressão em células eucarióticas. Desta forma, diversos anticorpos monoclonais específicos para a proteína de interesse foram gerados. Neste trabalho, fomos capazes de obter 154 amostras de soros de pacientes diagnosticados com dengue, dos quais 23 pacientes apresentaram altos títulos de anticorpos contra proteína do envelope, NS1 ou EDIII. Desses, oito pacientes apresentaram anticorpos de reatividade cruzada para os quatros sorotipos de dengue capazes de neutralizar mais que 90% da infecção, nove pacientes apresentaram capacidade acima de 80% de neutralizar um ou mais sorotipos e quatro pacientes apresentaram capacidade de neutralização abaixo de 30% para os quatros sorotipos de dengue. Além disso, constatamos que dentre os vírus testados, as amostras de soro dos pacientes apresentaram maior exacerbação da infecção para DENV1 (68%), DENV2 (75%) e DENV4 (75%). Em relação a resposta monoclonal, obtivemos os PBMCs de quatro pacientes e realizamos o single cell sorting a fim de isolar as células B de memória reativas contra proteína E recombinante. Dos 13 clones expressos, apenas quatro AcMos (anticorpo monoclonal) foram capazes de reconhecer a proteína E recombinante. Dentre os quatro AcMos, o clone MT479-F11 apresentou maior capacidade de neutralização para os quatros sorotipos de DENV (DENV1 ao DENV4), bem como para ZIKV, em comparação aos demais AcMos.