Avaliação da reação tecidual em subcutâneo de camundongos e expressão gênica de marcadores pró- e anti-inflamatórios após implante de BiodentineTM e MTA - Sá, Rafaela Cardoso de (2020)
Pulpotomia consiste na remoção da porção coronal de uma polpa vital como forma de preservar a vitalidade da porção radicular restante. Após esse procedimento, diversos materiais têm sido utilizados para o recobrimento da polpa radicular. Desses materiais, destacam-se o agregado trióxido mineral (MTA) e a BiodentineTM. Estudos têm avaliado e comparado a resposta inflamatória de ambos os materiais, a fim de identificarem um material capaz de promover um adequado processo de reparo, sem ação citotóxica ou irritante ao organismo. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a resposta tecidual, resposta imune e participação de citocinas pró- e anti-inflamatórias induzidas pelos materiais BiodentineTM e MTA em tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos isogênicos. Para isso, foram utilizados 120 camundongos isogênicos da linhagem BALB/c divididos em 4 grupos, sendo 2 experimentais (BiodentineTM e MTA nos períodos de 7, 21 e 63 dias) e 2 controles (Óxido de Zinco e Eugenol e sham, nos mesmos períodos). Decorridos os períodos experimentais, os blocos de tecido conjuntivo contendo o corpo de prova com o material foram removidos. A parte superior do tecido foi removido, fixado em formol e enviado para o processamento histotécnico de rotina para posterior análise microscópica com H&E. Já a parte inferior do bloco foi mergulhada em solução de RNAlater® para posterior análise da expressão gênica pela técnica de qRT-PCR. Foi realizada a descrição da reação tecidual em contato com cada material, análise semi-quantitativa do fibrosamento e do infiltrado inflamatório e análise quantitativa da espessura do tecido reacional granulomatoso em contato com o material testado ou o tecido conjuntivo do grupo sham. Foi realizado, também, o qRT-PCR para análise de expressão gênica de Il10, Infg, Il6, Tnf e receptor Il1r1. Os resultados foram comparados por meio do teste de KruskalWallis seguido do Pós-teste de Dunn ou pela análise de variância (ANOVA) de duas vias seguido pelo pós-teste de Bonferroni (α=5). Inicialmente os materiais BiodentineTM, MTA induziram um discreto fibrosamento do tecido conjuntivo, mas aos 21 dias ele tornou-se maior ao redor do MTA. Finalmente, no período final, todos os grupos apresentaram um fibrosamento discreto. Em relação ao infiltrado inflamatório, aos 7 dias, BiodentineTM e MTA induziram o recrutamento de células inflamatórias de intensidade moderada a intensa, e nos tempos seguintes a maioria dos espécimes mantiveram-se com infiltrado discreto. A espessura da cápsula fibrosa apresentou-se aumentada ao redor dos espécimes de BiodentineTM aos 7 dias, mas aos 21 e 63 dias, o tecido ao redor dos materiais não apresentou aumento de espessura. Ainda, observou-se que a BiodentineTM e o MTA foram capazes de inibir, ao longo dos períodos experimentais, a expressão dos marcadores pró-inflamatórios Tnf e Infg. Tanto a BiodentineTM quanto o MTA estimularam a expressão de Il6 nos períodos iniciais, mas aos 63 dias, o MTA inibiu a expressão dessa citocina, o que não aconteceu com a Biodentine. Para a Il1r1, a BiodentineTM e MTA não apresentaram efeito aos 7 dias. Aos 21 dias nenhum material modulou a expressão gênica, diferentemente do período de 63 dias quando BiodentineTM, MTA e ZOE induziram Il1r1. Observou-se ainda que a Il-10 teve sua expressão diminuída após estímulo com MTA e ZOE no período de 7 dias. Já aos 21 dias, a Biodentine foi capaz de estimular a expressão de Il-10 e no período final de avaliação apenas o ZOE foi capaz de modular a inibição dessa interleucina. Após análise dos dados, conclui-se que de maneira geral os materiais avaliados, MTA e BiodentineTM, mediaram a inflamação, com aumento do fibrosamento e produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias.