Sistemas de cultura de células, tecidos e órgãos de Arabidopsis thaliana (Linné) Heynhold in vitro - Ribeiro, Roberval de Cassia Salvador (1992)
Arabidopsis thaliana tem sido utilizada como planta modelo para estudos nas genéticas clássica e molecular. Várias das técnicas utilizadas na genética molecular dependem de um sistema para transferência de genes, que em muitos dos casos se baseiam em cultura de tecidos. Um dos ecótipos mais utilizados em estudos de biologia molecular. Landsberg erecta, é um dos que se apresentam mais recalcitrantes quando cultivados in vitro. Neste trabalho são apresentadas metodologias desenvolvidas especificamente para o ecótipo Landsberg erecta, no tocante ao cultivo de plantas, células em suspensão e a organogênese de células, órgãos e tecidos cultivados. O trabalho teve início com o cultivo de plantas em condições de casa de vegetação e in vitro. Duas técnicas de cultivo de plantas em casa de vegetação foram desenvolvidas, uma de semeadura definitiva em vasos e outra com pré- cultura em placas de Petri mantidas em câmara de crescimento. seguida de transplante e desenvolvimento em casa de vegetação. No tocante à cultura in vitro de plantas foram estudados os efeitos de oito agentes gelificantes (Agar. Bacto Agar. Agaroses 1 e 5, Phytagel, Gelrite, Seaplaque e Amido) e a otimização da troca gasosa, indicando que a tradicional cultura de plantas em meio gelificado com agar pode ser substituída com grandes vantagens por produtos alternativos, tanto em termos de produção de biomassa. como qualidade de plantas. A combinação de frasco aerado contendo meio com amido aumentou a massa de matéria seca em mais de 3 vezes para parte aérea e em mais de 10 vezes a raiz. quando comparado com meio gelificado com agar. O uso de filtros de espuma melhorou a troca gasosa e permitiu a produção de sementes in vitro, além de produzir plantas mais saudáveis, excelentes fontes de explantes. Das plantas cultivadas in vitro foram retirados explantes para outros estudos. Conseguiu-se regeneração de explantes cultivados de folha e de raiz. Através do uso de um meio original na organogênese de tecidos de Arabidopsis thaliana conseguiu-se reduzir o tempo de regeneração de plantas intactas férteis para apenas 60 dias, computados desde a inoculação do explante de raiz até a produção de sementes. Suspensões celulares foram estabelecidas a partir de plântula inteira, folha ou raiz, sendo que esta última foi a que produziu maior biomassa independentemente dos meios e temperaturas de cultivo utilizados. Tais suspensões celulares foram cultivadas em temperaturas que variaram de 22 a 30°C, encontrando-se como mais conveniente a de 26°C. Entre os quatro meios de cultura testados, dois foram selecionados, um contendo baixo teor de 2,4-D (0.2mg/l) e outro com teor de 2mg/l. Quanto à organogênese a partir de células cultivadas de raiz, observou-se que os meios contendo Thidiazuron, apesar de propiciarem regeneração de plantas em grande profusão, estas não produziram sementes. Por outro lado, meio contendo isopentenil adenina foi o que melhor aliou produtividade e fertilidade de regenerantes, não apresentando maiores dificuldades para a obtenção de plantas intactas, com sementes. Dentre os outros parâmetros estudados que estimularam a organogênese de células cultivadas encontra-se: o tamanho e quantidade de agregados celulares plaqueados; a pré-incubação desses agregados em meio de formação de calos por 7 dias; incubação a 4°C por 24 horas, no escuro, logo após a transferência ao meio de regeneração. O emprego de carbono ativado neutralizado, por sua vez, reduziu o escurecimento de brotos regenerados e o uso de filtros de espuma nos frascos de cultura, contribuiu, também neste caso, para que os regenerantes produzissem sementes