Hibridação somática entre limão Cravo (Citrus limonia Osbeck) e tangerina Cleópatra (Citrus reshni Hort.) - Latado, Rodrigo Rocha (1998)
Este trabalho teve como objetivo principal a produção de plantas híbridas somáticas entre duas espécies do gênero Citrus, o limão Cravo (Citrus limonia Osbeck) e a tangerina Cleópatra (Citrus reshni Hort.), como apoio ao melhoramento de porta-enxertos. O limão Cravo se constitui atualmente no principal porta-enxerto comercial utilizado no Brasil, devido as suas boas qualidades agronômicas. Entretanto, esta espécie é suscetível ao declínio dos citros, uma doença que é responsável pela morte e/ou eliminação de milhares de árvores cítricas por ano, no Brasil. A tangerina Cleóprata é uma espécie bastante utilizada como porta-enxerto em outros países e que tem sido descrita na literatura como tolerante ao declínio. Os impedimentos ligados à biologia reprodutiva das espécies do gênero Citrus dificultam ou, as vezes, até impedem o melhoramento mediante cruzamentos controlados. A hibridação somática em citros, por meio de fusão de protoplastos, tem possibilitado a produção de plantas híbridas tetraplóides, combinando características desejáveis de duas espécies. Este trabalho descreve o desenvolvimento de uma metodologia de isolamento e cultivo de protoplastos embriogênicos de suspensão celular das duas espécies, resultando na obtenção de plantas aparentemente idênticas às espécies parentais. A aclimatação das plantas ao meio ambiente foi considerada como a fase mais crítica do processo. Uma metodologia de isolamento de protoplastos de mesofilo das duas espécies também foi ajustada. Nas densidades de cultivo de 1 e 2 x 105 protoplastos.ml-1 de suspensão celular de limão Cravo e tangerina Cleóprata, observou-se a eficiência máxima de plaqueamento (5 a 15%). A porcentagem de obtenção de células heterocariontes (híbridas), logo após a adição de PEG foi de 5,0 a 6,9 %. Dois métodos de fusão, com uso de PEG, foram testados e não apresentaram diferença significativa em termos de formação de células heterocariontes. Experimentos de fusão, com uso do polietileno glicol, foram realizados envolvendo protoplastos de suspensão celular e de mesofilo das duas espécies. Destes experimentos foram obtidas mais de 500 plantas. A seleção e a confirmação dos híbridos somáticos tetraplóides nestas plantas foram realizadas por meio de marcadores moleculares RAPD e marcadores isoenzimáticos. Como resultado, 11 plantas foram confirmadas como sendo híbridos somáticos.