Efeito do preparo químico-cirúrgico na atividade bacteriana em canais radiculares associados a periodontite apical assintomática: estudo molecular baseado em RNA e DNA - Vilela, Bruna Gontijo (2021)
O preparo químico-cirúrgico (PQC) representa a principal estratégia para a desinfecção dos canais radiculares. Entretanto, apesar da significativa redução bacteriana promovida pelo PQC, um grande número de casos permanece infectado após estes procedimentos. Como as células metabolicamente ativas apresentam maior quantidade de RNA ribossômico (rRNA) que de rDNA (genes rRNA), os resultados obtidos pela reação em cadeia da polimerase quantitativa baseada em rDNA (qPCR) e rRNA (RT-qPCR) foram correlacionados a fim de detectar bactérias metabolicamente ativas após o preparo químico-cirúrgico (PQC). Além disso, a capacidade dos dois métodos de detectar bactérias nas amostras endodônticas foi avaliada. Amostras de canais radiculares foram coletadas de 40 dentes com infecções endodônticas primárias antes (S1) e após o PQC (S2). DNA e cDNA (sintetizado a partir do RNA) foram utilizados como molde para a reação de qPCR utilizando iniciadores universais para o domínio Bacteria. Após o PQC foi observada uma drástica redução do número total de bactérias. Os níveis de cópias de rRNA nas amostras S2 foram significativamente maiores que os níveis correspondentes de rDNA (p < 0.05), demonstrando a persistência de bactérias metabolicamente ativas após o PQC. O ensaio de qPCR baseado em rDNA apresentou baixa sensibilidade e alta especificidade quando comparado ao ensaio de RT-qPCR. Todas amostras positivas para rDNA também exibiram resultados positivos para rRNA (valor preditivo positivo = 100%). O uso combinado de qPCR e RT-qPCR revelou que bactérias permaneceram metabolicamente ativas após o PQC. Embora menos sensível que o ensaio de RT-qPCR, o ensaio de qPCR baseado em rDNA apresentou baixo risco de resultados falso-positivos na análise de bactérias totais em amostras pós-preparo.