Produção de quimeras germinativas em caraciformes neotropicais para aplicação na aquicultura e conservação - Carvalho, Gabriella Braga (2021)
O transplante de células germinativas é uma abordagem promissora para a conservação e reconstituição de espécies de peixes ameaçadas de extinção. Para realizar essa biotecnologia, são necessários procedimentos espécie-específicos aplicados às espécies nativas. Este estudo teve como objetivo estabelecer técnicas de isolamento, caracterização e criopreservação de oogônias-tronco de Matrinxã (Brycon amazonicus), seguido de transplante em larvas triploides e transplante de células germinativas primordiais de Brycon amazonicus em embriões triploides (3N) de (Astyanax altiparanea) e híbridos triploides (H3N) de (Astyanax altiparanea x Astyanax fasciatus). Para tal, as gônadas de B. amazonicus foram digeridas enzimaticamente e as células germinativas tronco foram separadas por gradiente descontinuo de densidade e purificadas. A caracterização das oogônias-tronco foram feitas por análises morfológicas e expressão gênica, e posteriormente foram criopreservadas. As oogônias-tronco recém purificadas e criopreservadas de Brycon amazonicus foram marcadas com PKH26 e transplantadas na região da cavidade intraperitoneal em larvas triploides com 22 dias após a eclosão. Os resultados demonstraram que as análises de expressão gênica e expressão relativa evidenciaram uma baixa expressão dos genes de interesse para essas células, principalmente quando analisamos as expressões de nanog e oct4. A utilização do crioprotetor propanodiol a 2 M em células provenientes do gradiente de percoll, foi o mais eficaz na criopreservação quanto a viabilidade celular, sendo obtido cerca de 90% de viabilidade após descongelamento. Dez dias após o transplante de oogônias-tronco, foi possível identificar a presença das células doadoras em ambos tratamentos (oogônias-tronco recém purificadas e criopreservadas), no entanto, nos dias seguintes não foi observado a presença destas células nas cristas genitais dos hospedeiros. O transplante de células germinativas primordiais (PGCs) foi realizado utilizando as células GFP (proteína verde fluorescente) positivas no estágio de segmentação de B. amazonicus, nos embriões receptores 3N e H3N na região marginal lateral da blastoderme. Após o transplante, as células doadoras foram visualizadas durante todo o desenvolvimento embrionário, inclusive na eclosão, no entanto, não apresentaram migração e colonização. Este é o primeiro relato sobre o transplante de células germinativas utilizando larvas e embriões como receptores em espécies neotropicais. No entanto, para o nosso estudo, outros parâmetros devem ser otimizados para geração de quimeras germinativas e assim, poderão ser futuramente empregados em outras espécies nativas que estão em perigo de extinção ou de importância na aquicultura.