Aplicação da proteômica na determinação da glicação A1C e na identificação de variantes de hemoglobina a partir de microamostragem volumétrica absortiva - Lima, Débora Araújo de (2022)
A hemoglobina glicada (HbA1c) é o principal marcador de controle glicêmico de longo prazo usado clinicamente no mundo, e seus valores estão diretamente associados à quantidade de glicose disponível na corrente sanguínea. Atualmente existem diversos métodos disponíveis para esta determinação, porém estes em menor ou maior grau possuem limitações, principalmente quando na presença de hemoglobinas variantes. Devido à sua alta especificidade, a espectrometria de massas tem alto potencial para reduzir as interferências apresentadas por outros ensaios na avaliação de marcadores sanguíneos. A aquisição independente de dados é um dos modos de aquisição da espectrometria de massas em tandem que permite uma cobertura abrangente do proteoma e tem o potencial de funcionar como um protocolo unificado para determinar uma infinidade de proteínas no sangue. Neste estudo, combinamos a aquisição independente de dados com microamostragem volumétrica absortiva e processamento de amostra proteômica automatizada como uma plataforma para realizar a determinação de marcadores clínicos. Avaliamos, como prova de conceito, dois biomarcadores clínicos relacionados à hemoglobina: hemoglobina glicada (HbA1c) e variantes de hemoglobina (Hbvar). Alcançamos o processamento da amostra em menos de 6 horas e a análise de espectrometria de massa otimizada exigiu 30 minutos. HbA1c por DIA mostrou boa correlação com o método de referência, mas a imprecisão do método não atendeu à especificação de imprecisão muito baixa para a avaliação clínica deste biomarcador. Uma estratégia para identificação de Hbvar foi desenvolvida com base em um banco de dados customizado combinado com um fluxo de trabalho para extração de dados DIA e avaliação rigorosa de peptídeos. Esta abordagem revelou Hbvars não identificados por métodos rotineiramente clínicos, como Hb Woodville e Hb Okayama. Usar o VAMS com um método de aquisição abrangente pode permitir a determinação de vários marcadores clínicos. Como poucas metodologias demonstraram aplicabilidade clínica do DIA, os resultados quantitativos e qualitativos apresentados aqui fornecem informações adicionais sobre sua força e deficiências para a rotina clínica. Os dados DIA estão disponíveis através do repositório Panorama via https://panoramaweb.org/x5nqYH.url (identificador do ProteomeXchange PXD029918).