Caracterização molecular e classificação funcional de novos padrões de expressão génica e de RNA não codificadores no tecido testicular de homens com infertilidade genética ou idiopática - Wester, Jorge Victor Wilfredo Cachay (2021)
A infertilidade masculina é uma condição patológica com causas genéticas, não genética, multifatoriais e idiopáticas que resultam em fenótipos heterogêneos diversos, observados principalmente no ejaculado e no tecido testicular. O objetivo do presente trabalho foi identificar os processos biológicos e vias gênicas desregulados na infertilidade masculina primária causada por diversas etiologias utilizando a detecção e quantificação de moléculas de RNA no tecido testicular de homens inférteis. Para isto, selecionamos tecido parafinizado e biopsia fresca de testículo de homens inférteis. As amostras foram classificadas de acordo ao fenótipo obtido do espermograma, do tipo de histologia e da etiologia. O transcriptoma das amostras parafinizadas foi obtido mediante experimentos de RNA-seq e small RNA-seq, enquanto que o transcriptoma das amostras de biópsia fresca foi obtido mediante experimentos de expressão génica por microarranjos. A quantificação e classificação dos RNAs foram obtidas mediante a análise de Bioinformática dos dados genómicos. A quantificação de alguns genes foi validada por experimentos de RT-qPCR. Os resultados mostraram padrões de expressão génica diferentes entre as etiologias da infertilidade masculina primária, observamos que os idiopáticos com SCOS (síndrome de célula de Sertoli) têm alteração na adesão celular. Os idiopáticos com MA (parada de maturação) têm falha na morfogênese celular. A síndrome de Klinefelter apresentou alteração no processo de splicng. As microdeleções na região AZF geram a perda de genes associados ao catabolismo e a translocação robertsoniana tem perda da expressão de genes sub centroméricos. Outrossim, identificamos novos processos biológicos associados a disfunção da espermatogênese pela variação na expressão de microRNA em SCOS idiopáticos. O transcriptoma das biópsias frescas revelou a desregulação de vias gênicas e RNAs não codificadores da espermatogênese. Finalmente, nós concluímos que a variação dos padrões de expressão génica assim como a hierarquia dos processos biológicos alterados ocorre de forma independente da etiologia da infertilidade masculina primaria.