Caracterização molecular e fenotípica de linhagens de Salmonella 1,4, [5],12:i:- isoladas predominantemente no Estado de São Paulo entre 1983 e 2020 - Pereira, Giovana do Nascimento (2023)
A salmonelose é uma das principais doenças diarreiogênicas transmitidas por alimentos contaminados. Salmonella 1,4,[5],12:i:-, uma variante monofásica de Salmonella Typhimurium tem sido associada a casos de gastroenterite em humanos e animais em diferentes países. No Brasil, S. 1,4,[5],12:i:- foi identificada como uma das principais sorovariedades isoladas no Estado de São Paulo. Entretanto, há poucos estudos que analisaram o potencial patogênico, o perfil de resistência a antimicrobianos e a diversidade genotípica de tal variante no país. Assim, este trabalho teve como objetivo caracterizar molecularmente e fenotipicamente linhagens de S. 1,4, [5],12:i:- isoladas predominantemente no Estado de São Paulo, Brasil. Para isso, foram analisadas 113 linhagens de S. 1,4, [5],12:i:- isoladas de humanos (n=99), animais (n=7), alimentos (n=5) e ambiente (n=2) no período de 1983 a 2020. A frequência de 11 genes de virulência foi pesquisada por PCR e o teste de susceptibilidade frente a 13 antimicrobianos foi realizado por disco difusão para todas as linhagens. Em linhagens fenotipicamente resistentes às fluoroquinolonas foram pesquisados genes de resistência plasmidiais e mutações em regiões determinantes de resistência as quinolonas. A tipagem molecular foi realizada por PFGE e ERIC-PCR para todas as linhagens. Além disso, 40 linhagens isoladas de humanos (n=26) e de fonte não humana (n=14) foram tipadas por MLST e caracterizadas fenotipicamente quanto à sobrevivência ao stress ácido e oxidativo. A análise de virulência em Galleria mellonella foi realizada para 20 linhagens selecionadas e os resultados obtidos dos ensaios de sobrevivência em condições de stress, assim como os de virulência em G. mellonella foram comparados com dados de linhagens de S. Typhimurium isoladas no país. Todos os genes associados à virulência analisados foram detectados em mais de 91% das linhagens estudadas, sendo os de maior ocorrência invA (100%), flgK (99,11%), sipD e sopB (98,23%). Das 113 linhagens estudadas, 54,87% foram resistentes a pelo menos um dos antimicrobianos testados. As maiores taxas de resistência observadas foram frente à ampicilina (51,33%), ácido nalidíxico (39,82%) e tetraciclina (38,05%). Ademais, 39 (34,51%) linhagens apresentaram um perfil Multidroga Resistente (MDR). As nove linhagens resistentes as fluoroquinolonas apresentaram mutação no gene gyrA e a presença do gene qnrB. O dendrograma de similaridade genética do PFGE agrupou as linhagens em quatro clusters denominados PFGE-A a PFGE-D. O cluster que agrupou o maior número de linhagens foi o PFGE-A, onde foram alocadas 86 (76,1%) linhagens isoladas de humanos, alimentos, animais e ambiente entre 1983 e 2020 com ≥79,5% de similaridade genética. O dendrograma de similaridade genética do ERIC-PCR agrupou as linhagens em dois clusters nomeados ERIC-A e ERIC-B. O principal cluster foi o ERIC-A que agrupou 104 (92%) linhagens isoladas de humanos, animais, alimentos e ambiente com ≥80,1% de similaridade genética entre si. Todas as 40 linhagens isoladas de humanos e de fonte não humana tipadas por MLST foram pertencentes ao ST19 e sobreviveram ao stress ácido após 10 minutos e 1 hora de exposição. No stress oxidativo, todas as 40 linhagens sobreviveram após 10 minutos e 36 sobreviveram após 1 hora de exposição. Adicionalmente, na análise de virulência em G. mellonella, nove linhagens isoladas de fonte não humana e seis linhagens isoladas de humanos demonstraram perfis de alta virulência a virulência intermediária. Em conclusão, o potencial patogênico das linhagens estudadas foi evidenciado pela alta frequência de todos os genes associados à virulência pesquisados. Linhagens MDR foram detectadas e são preocupantes e alertam para a importância de um monitoramento constante da resistência. Os resultados do PFGE e ERIC-PCR sugeriram que a maioria das linhagens estudadas pertencem a um cluster prevalente ao longo de décadas no Estado de São Paulo e a circulação dessa sorovariedade entre fontes clínicas e não clínicas. Todas as linhagens estudadas descendem de um precursor comum pertencente ao ST19, sugerindo uma relação filogenética mais próxima a S. Typhimurium do que linhagens de Salmonella monofásica do ST34 isoladas em outros países. As linhagens de S.1,4, [5],12:i:- isoladas de humanos e de fonte não humana sobreviveram com sucesso em condições desfavoráveis presentes no trato gastrointestinal dos hospedeiros e apresentaram taxa de sobrevivência semelhante a S. Typhimurium. Finalmente, linhagens isoladas de fontes não humanas apresentaram maior proporção de isolados com perfil de virulência alto a intermediária em G. mellonella comparado a isolados de humanos, diferindo dos resultados encontrados em S. Typhimurium e sugerindo uma possível diferença entre essas sorovariedades geneticamente relacionadas.