Avaliação da participação da via de sinalização Wnt no efeito analgésico da crotalfina in vivo e in vitro. - Hösch, Natália Gabriele (2022)
As proteínas Wnt constituem uma família de moléculas sinalizadoras que regulam diversos processos celulares. Dentre esses processos, estão a proliferação, diferenciação e migração celular, que ocorrem durante o desenvolvimento do sistema nervoso. As proteínas Wnt se ligam a receptores Frizzled e a correceptores, os quais ativam duas vias de sinalização intracelular a via canônica/dependente de bcatenina ou a via nãocanônica/independente da bcatenina. Estudos recentes apontam correlação entre a ativação aberrante das vias de sinalização Wnt, como a via Wnt/b-catenina e a via atípica Wnt/Ryk, com a instalação e persistência da dor neuropática (DN). Esses dados apontam para a possibilidade do uso de compostos que interfiram com a sinalização Wnt, como agentes terapêuticos para a DN. A crotalfina (CRO) é um peptídeo de 14 aminoácidos, inicialmente isolada do veneno da serpente Crotalus durissus terrificus, que possui efeito antinociceptivo de longa duração, mediado pela ativação de receptores canabinóides CB2, com subsequente liberação de dinorfina A e ativação de receptores kopioides. A interação entre os sistemas canabinóide e opióide pode acarretar diminuição na secreção das proteínas Wnt, contudo, os efeitos destes sistemas sobre estas proteínas não estão totalmente caracterizados. No presente estudo, foi investigado se a CRO é capaz de interferir com a ativação das vias Wnt/b-catenina e Wnt/Ryk durante a DN, assim como os mecanismos envolvidos nessa ação. Para indução da DN, foi utilizado o modelo de constrição crônica do nervo isquiático (CCI) de ratos. No 14° dia pós-CCI, os animais foram tratados com a CRO. Amostras de DRG e medula espinhal foram utilizadas para a análise da expressão de proteínas relacionadas às vias de sinalização Wnt, por meio da técnica de Western Blot. Para avaliar os possíveis mecanismos envolvidos na ação da CRO, foram utilizados antagonistas ou agonistas de receptores canabinóides e opióides. Os resultados mostraram que a CCI aumenta a expressão das proteínas relacionadas à sinalização Wnt, no DRG e na medula espinhal dos ratos. A CRO (50 mg/kg, p.o.) reverteu o aumento nos níveis das proteínas Wnt-3a e Wnt-5b, no DRG e medula espinhal. Ainda, o tratamento com a CRO inibiu as vias de sinalização Wnt/b-catenina e Wnt/Ryk. Foi observada, ainda, redução, pela CRO, na ativação do receptor NR2B e dos sinais dependentes de cálcio CaMKII, ERK 1/2, PKCg e CREB, os quais estão relacionados com a ativação do receptor Ryk. O antagonista de receptores opioides, Naloxona, não interferiu com o efeito da CRO sobre as vias de sinalização Wnt. Entretanto, o tratamento prévio com o antagonista AM630, inibiu a ação da CRO sobre essas proteínas, mostrando que a ativação dos receptores CB2 medeia o efeito deste peptídeo sobre a sinalização atípica Wnt/Ryk. Esses resultados sugerem que a CRO é capaz de modular as vias de sinalização Wnt durante a DN e que esse efeito é mediado, pelo menos em parte, pela ativação dos receptores canabinóides CB2.