O papel da enzima nicotinamide nucleotide transidrogenase na esteroidogênese adrenal e testicular - Bodoni, Aline Faccioli (2022)
CONTEXTO: A enzima Nicotinamide Nucleotide Transidrogenase (NNT) é fundamental para os mecanismos de defesa antioxidante mitocondriais e parece ser essencial para as etapas da esteroidogênese que ocorrem na mitocôndria. Mutações no gene NNT foram recentemente encontradas em pacientes com deficiência familiar de glicocorticoide (DFG). Entretanto, os mecanismos envolvidos são parcialmente conhecidos e não está claro por que a produção de aldosterona não parece ser comprometida. OBJETIVOS: Avaliar como a NNT atua na esteroidogênese adrenal e verificar a importância dessa enzima na esteroidogênese testicular. MÉTODOS: Caracterização da expressão de NNT em tecidos adrenal e testicular por meio de imunoistoquímica. Para determinar o papel específico da NNT na esteroidogênese adrenal, construímos um modelo nocaute (KO) estável do gene NNT na linhagem celular adrenal H295R usando a tecnologia CRISPR/Cas9. Avaliamos o efeito das alterações do NNT no tráfego de Colesterol (NBD-Colesterol) e nos parâmetros mitocondriais, bem como na esteroidogênese adrenal pela produção de cortisol (RIA) e aldosterona (ELISA). Para avaliar a esteroidogênese gonadal em células testiculares MA-10, inibimos a expressão do RNAm de Nnt usando siRNA e avaliamos os parâmetros mitocondriais, bem como a esteroidogênese gonadal avaliando a produção de testosterona (RIA). RESULTADOS: Nos tecidos avaliados NNT foi mais expressa na zona de transição de adrenais fetais. Em adrenais adultas essa proteína é mais expressa na zona fasciculada do córtex adrenal. Em testículos fetais a proteína NNT foi mais expressa em células de Leydig. O clone selecionado após a inibição do NNT pelo sistema CRISPR/Cas9 mostrou aumento da produção de EROs, diminuição na marcação mitocondrial e diminuição do tamanho e densidade de gotículas de colesterol e comprometimento na secreção de cortisol e aldosterona. Em comparação com o tipo selvagem, a variante NNT p.G866D, em homozigose, exibiu um aumento na produção de EROs. A inibição da expressão do gene Nnt na linhagem celular testicular alterou os parâmetros mitocondriais, mas manteve a secreção de testosterona. CONCLUSÕES: Mutações com perda de função da NNT prejudicam os mecanismos antioxidantes por comprometerem o sistema da glutationa redutase, resultando no acúmulo de ROS. Sem NNT as células adrenais diminuem secreção de cortisol e de aldosterona. Por outro lado, em células testiculares, a redução da NNT compromete o mecanismo REDOX, porém não é suficiente para reduzir a produção de testosterona. Juntos, esses dados esclarecem os mecanismos pelos quais as mutações do NNT resultam em insuficiência adrenal primária sem insuficiência gonadal.