Avaliação de modelos in vitro para o estudo da inativação do cromossomo X em humanos - Orsi, Ana Elisa Ribeiro (2023)
A inativação do cromossomo X (ICX) é um processo de compensação de dose que ocorre nas células fêmeas de mamíferos placentários. A ICX em humanos inicia-se por volta do estágio de blastocisto, e seu entendimento é prejudicado pelas dificuldades associadas ao uso de embriões em pesquisa. Para lidar com esse problema, nós avaliamos diferentes modelos para o estudo da ICX in vitro. Células no estado primed exibiram expressão monoalélica do gene MECP2, ligado ao cromossomo X, e uma única nuvem de XIST. Após conversão para o estado naive, expressão bialélica do gene MECP2 foi observada, assim como a ausência de nuvens de XIST durante as primeiras duas passagens. Avaliação de EPSCs in vitro e in silico sugeriram que essas células já passaram pelo processo de ICX. Resultados similares foram observados para células cultivadas no meio 4CL. Depois de nova conversão para o estado primed, células naive cultivadas em 5iLA passaram pela inativação do mesmo alelo do gene MECP2 previamente inativo. Por outro lado, blastoides gerados a partir de células cultivadas no meio PXGL demonstraram ICX progressiva e aleatória, apesar de viés para re-inativação do alelo de MECP2 previamente inativo ter sido observado. Esses resultados sugerem que blastoides humanos podem ser usados para o estudo da ICX humana in vitro.