Produção de vacinas antitumorais utilizando a Terapia Fotodinâmica - Grande, Murilo Penteado Del (2019)
A terapia fotodinâmica (Photodynamic Therapy - PDT) é um método de tratar neoplasias aprovado para uso clínico em diversos países. Seu mecanismo de ação baseia-se na interação entre luz, oxigênio molecular e um agente fotossensibilizante. A característica singular da PDT é a capacidade de induzir resposta imunológica adaptativa contra recidivas tumorais e/ou metástases, determinando uma resposta específica, de longo prazo, para a neoplasia tratada. O presente estudo teve o objetivo de desenvolver um novo tratamento adjuvante para o melanoma baseando-se nos efeitos da Terapia Fotodinâmica sobre o sistema imunológico. Como objetivos específicos, o estudo visa estabelecer um protocolo de coleta e processamento de amostras de melanoma murino B16 -F10 e serem tratadas in vitro com a terapia fotodinâmica, baseada no Azul de Metileno (AM) e Laser vermelho, produzindo assim a vacina e testar a sua eficácia para imunização de camundongos contra o melanoma B16-F10 e testar sua eficácia para o tratamento de melanoma B16-F10 em camundongos. Três experimentos foram realizados sequencialmente, os quais estão organizados em 3 capítulos. No primeiro experimento (CAPÍTULO 2) são abordados os procedimentos in vitro realizados para, utilizando a PDT-AM, ser obtido o lisado de células do melanoma B16-F10, contendo variados antígenos tumorais e DAMPs (do inglês: Damage Associated Molecular Patterns), podendo assim ser utilizado como uma vacina terapêutica. Com este propósito foram realizados diversos protocolos onde se variou a concentração do AM, assim como a dose de energia com o qual as células foram irradiadas com o laser, sendo então realizadas diversas técnicas analíticas para a interpretação dos resultados e determinação do protocolo mais apropriado. Demonstrou-se que a PTD-AM tem efeito antineoplásico in vitro nos melanomas murinos B16-F10, reduzindo a viabilidade celular e induzindo a morte por apoptose, que aumenta de forma diretamente proporcional à concentração do agente fotossensibilizante e a dose de energia irradiada. A PDT-AM é um método promissor no tratamento do melanoma maligno, sendo as concentrações do AM e as doses de energia aqui estabelecidas servindo de base para futuros estudos. Ademais, concluiu-se que a dose de 2 µg/ml do azul de metileno associado a irradiação do laser com dose de energia em 100,8 J, é o regime de tratamento ótimo, onde há cerca de 50 de células em morte celular por apoptose e com um índice de viabilidade celular após 24h de menos de 20%, para produção do lisado tumoral a ser utilizado como vacina terapêutica. No segundo experimento (CAPÍTULO 3) foram avaliados os efeitos da imunização com lisado de células do melanoma B16-F10, produzido in vitro com a PDT-AM, sobre a progressão do volume do melanoma B16 -F10 em camundongos. Avaliou-se também os efeitos da imunização com lisado de células do melanoma B16-F10 sobre os órgãos do sistema imunológico (Baço e Linfonodo), e sobre a população de linfócitos T CD3+ dos órgãos do sistema imunológico (Baço e Linfonodo). Como resultados, demonstrou-se a capacidade imunogênica de lisados de células tumorais da linhagem de melanoma murino B16-F10 produzidos in vitro com a PDT-AM, assim como dos lisados produzidos por congelamento. A aplicação do lisado antes da inoculação tumoral foi capaz de atenuar, atrasar e, em parte dos animais, impedir a progressão do melanoma B16-F10 em camundongos BALB/c, além de induzir alterações em baço e linfonodo regional, caracterizando resposta por linfócitos T contra as células neoplásicas. Já no terceiro experimento (CAPÍTULO 4), buscou-se estudar o efeito do lisado de células do melanoma B16-F10, removido parcialmente por cirurgia, após inoculação em camundongos C57 BL/6, como vacina antitumoral terapêutica. Da mesma forma, avaliaram-se os efeitos do lisado de células tumorais sobre a progressão tumoral e sobre os órgãos do sistema imunológico (Baço e Linfonodo) e sobre a população de linfócitos T CD3&#43 nos órgãos do sistema imunológico (Baço e Linfonodo). Como resultados, demonstrou-se a capacidade imunogênica de lisados de células do melanoma B16-F10, removido parcialmente por cirurgia, após inoculação em camundongos C57 BL/6, para então ser submetido, in vitro, a PDT-AM, assim como dos lisados por produzidos por congelamento. A aplicação do lisado como vacina terapêutica foi capaz de atenuar a progressão do melanoma B16-F10 nestes camundongos, além de induzir alterações em baço e linfonodo regional, caracterizando resposta por linfócitos T contra as células neoplásicas. Em conclusão, o presente trabalho utilizou a terapia fotodinâmica baseado no Azul de Metileno e Laser de diodo emitindo espectro vermelho para produzir lisado de células tumorais do melanoma murino B16-F10, sendo este lisado utilizado para indução de resposta imunológica antitumoral específica. Os resultados encontrados mostram que a técnica foi capaz de gerar efeitos sobre o sistema imunológico, sendo capaz de, ao menos, atenuar a velocidade de progressão do melanoma B16-F10 em camundongos.