Estudo da alteração da expressão gênica em linhagens de Aspergillus nidulans submetidos ao tratamento com RNA heterólogos - Hitzschky, Katia Regina Evaristo de Jesus (2003)
Fungos filamentosos, em particular Aspergillus , têm sido explorados pela sua habilidade em produzir altos níveis de proteínas extra-celulares de maneira econômica. Desde que muitas proteínas humanas com potencial terapêutico são secretadas e requerem modificação pós-tradução para apresentarem atividade biológica, sistemas de expressão-secreção têm sido alvo de pesquisas. Desenvolvimentos recentes em sistemas de transformação mediada por DNA, tem permitido a utilização do Aspergillus como hospedeiro para produção de proteínas de interesse biotecnológico, uma vez que, esse fungo apresenta características interessantes, tais como, genética bem caracterizada e a disponibilidade de muitos mutantes. Em trabalhos anteriores, realizados pelo nosso grupo, protoplastos de Aspergillus nidulans foram tratados com RNA de uma linhagem de Saccharomyces cerevisiae altamente produtora de insulina. Através desta metodologia foram obtidas linhagens instáveis que apresentavam rápido consumo de glicose do meio de cultura. A análise da instabilidade mitótica das linhagens tratadas, foi realizada através da observação da alteração do comportamento dos seus marcadores genéticos e dos seus setores. O tratamento com RNA foi o responsável tanto pela instabilidade, como por promover ativação/inativação gênica, mitótica e meiótica evidenciada através da análise das variações das sequências de recombinações nos cruzamentos das linhagens tratadas, com linhagens Manter de Aspergillus nidulans . A alteração do perfil protéico e micotoxigênico das linhagens tratadas em relação à linhagem controle UT448, nos permitiu, comprovar o efeito estressante do tratamento com RNA no genoma das linhagens. As linhagens tratadas não apresentaram o gene da insulina inserido nos seus genomas. O elevado consumo de glicose nestas linhagens foi decorrente de um aumento na produção da enzima glicose oxidase, evidenciado nos sobrenadantes das culturas.