Desenvolvimento de nanodispersões lipídicas contendo insulina para tratamento tópico da doença do olho seco - Pereira, Francieli (2017)
A doença do olho seco (DOS) é uma desordem multifatorial relacionada a um processo inflamatório das estruturas oculares. Ela afeta a produção do filme lacrimal e resulta em feridas na córnea que são de difícil cicatrização. Estudos recentes demonstraram que a insulina (INS) facilita o processo de cicatrização de feridas e restaura a produção de filme lacrimal em ratos diabéticos. No entanto, a INS é uma proteína que degrada com facilidade em meio biológico, carecendo de estratégias que melhorem sua biodisponibilidade para sua administração ocular. Neste contexto, lipossomas podem ser um veículo promissor para liberação tópica ocular da INS devido a sua biocompatibilidade, baixa toxicidade e alto tempo de residência na superfície ocular. Sendo assim, o objetivo do presente trabalho foi desenvolver lipossomas contendo INS para uso tópico no tratamento da DOS. Pelo método de hidratação do filme lipídico e homogeneização em homogeneizador de alta pressão, foram preparados lipossomas compostos por fosfatidilcolina de soja (PC), colato de sódio (NaC) e poloxamer 188 em tampão fosfato salino (PBS) 10 mM pH 7,4. A INS foi adicionada ao tampão PBS, usado para hidratação do filme lipídico, na concentração de 0,4 mg/mL. Os lipossomas foram esterilizados por filtração em membrana 0,22 µ e caracterizados quanto ao tamanho de partícula e índice de polidispersão (PdI) por espalhamento dinâmico de luz, potencial zeta, pH, eficiência de encapsulação (EE,%) e recuperação do fármaco (RF,%). Lipossomas de 125±3 nm, PdI de 0,27±0,01, potencial zeta de -11±1,5 mV, pH 7,1, EE 32±2% e RF 82±12% foram obtidos. Imagens de microscopia eletrônica de transmissão e de força atômica permitiram a observação de vesículas esféricas e assimétricas na presença de INS, com diâmetro médio variando de 120 a 150 nm. Estudos realizados por espalhamento de raios-X a baixo ângulo (SAXS) mostraram que a bicamada lipídica dos lipossomas contendo INS apresentaram simetria, com espessura de 42 Å, e INS dispersa em populações compostas por 6 a 15 monômeros com tamanho hidrodinâmico variável. Armazenados a 4°C, os lipossomas mantiveram suas características físicas estáveis por até 60 dias; e à temperatura ambiente, não houve degradação da INS por pelo menos 72 h. O ensaio in vitro de irritação ocular HET-CAM demonstrou baixo potencial irritante para as formulações sem e com INS. Estudos em cultura de células de epitélio de córnea humana (HCE) imortalizada demonstraram que o tratamento com as formulações contendo 1 UI de INS não foram citotóxicos e não promoveram aumento de MMP-9 em relação aos controles. Observou-se, no entanto, aumento na produção de IL-6, o qual pode contribuir para a cicatrização de feridas. Desta forma, os lipossomas demonstraram ser um sistema de liberação promissor para a administração tópica ocular da INS para DOS e cicatrização de feridas.