Adaptação de metodologias de cultura de tecidos visando o melhoramento através de indução de mutações em Citrus sinensis (L.) Osbeck cv. Pera - Cristofani, Mariangela (1991)
O melhoramento de citros através de métodos convencionais tem sérias limitações devido à existência dos embriões nucelares nas sementes das espécies poliembriônicas, ao alto grau de heterozigose e ao longo ciclo reprodutivo, entre outros fatores. A cultura de tecidos surgiu cama uma técnica auxiliar no melhoramento das espécies cítricas visando transpor as dificuldades encontradas na aplicação das métodos convencionais. Esta técnica também tem sido empregada em trabalhas com indução de mutações, visando a obtenção de mutantes sólidos quando se utilizam agentes mutagênicos para aumentar a frequência das mutações. O presente trabalho teve como objetivo adaptar diferentes metodologias de cultura de tecidos no cv. Pera (Citrus sinensis Osbeck. ),visando futuros trabalhas com indução de mutações. Nucelos foram extraídos de sementes de frutos imaturos, 12 semanas após a antese. Embriões somáticos foram produzidos diretamente a partir destes explantes em meio MT, com diferentes concentrações de IAA e CIN. o meio suplementado com 1,0 mg/l de CIN favoreceu a formação de embrióides, principalmente através da formação de embrióides a partir dos já existentes. Calos embriogênicos foram produzidos diretamente a partir dos nucelos em meio MT suplementado com BAP (10 mg/l). Um grande número de embri6ides foi obtido a partir dos calos, sendo que o meio MT suplementado com 50 g/l de lactose e 500 mg/l de extrato de malte foi o mais eficiente. Os embrióides produzidos a partir dos nucelos ou a partir de calos nucelares foram capazes de se desenvolver e regenerar plantas, em meio MT contendo 50 g/l de sacarose e 500 mg/l de extrato de malte. Protoplastos foram isolados a partir dos calos embriogênicos e sua viabilidade foi verificada pelo teste com diacetato de fluoresceína. O rendimento no isolamento foi de 1,03x10 protoplastos por grama de calo e a viabilidade de 84% foi verificada logo após o processo de purificação dos mesmos. Brotações adventícias foram induzidas a partir dos cotilédones extraídos de embriões nucelares. As brotações foram obtidas em meio MT contendo diferentes concentrações de NAA e BAP e suas combinações. Entretanto, o meio contendo 0,5 mg/l de BAP e 1,0 mg/l de NAA foi o que apresentou maior número de brotaç5es por explante responsivo. Ensaios de doses de radiação gama foram conduzidos nos diferentes materiais: nucelos, calos nucelares, cotilédones de embriões nucelares e protoplastos, visando a determinação de doses recomendáveis para futuros trabalhos utilizando estes explantes na indução de mutações.