Caracterização farmacológica de doadores de sulfeto de hidrogênio (H2S) na resposta vasomotora in vitro de anéis de artéria mesentérica de camundongos. - Marques, Leonardo André da Costa (2020)
A importância do sulfeto de hidrogênio (H2S) na fisiopatologia é cada vez mais explorada, incluindo os efeitos benéficos de doadores de H2S no sistema cardiovascular e na inflamação. Novos compostos com especificidade mitocondrial, como o AP39, fornecem H2S diretamente nas mitocôndrias, embora seus mecanismos de ação ainda sejam desconhecidos. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos e descrever os mecanismos de ação de dois tipos de doadores de H2S, o doador espontâneo hidrossulfeto de sódio (NaHS) e mitocondrial AP39, na reatividade vascular de artérias mesentéricas de camundongos. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética no Uso de Animais do ICB/USP (CEUA 7759060218). Camundongos C57BL/6 anestesiados foram eutanasiados e seus leitos mesentéricos dissecados, para a dissecção de artérias mesentéricas de primeira ordem. Montou-se anéis destas artérias em miógrafo de arame para registro de tensão isométrica. As atividades vasculares dos compostos AP39, ADT-OH (porção doadora de H2S do AP39) e NaHS foram avaliadas sobre o tônus basal e sob pré-contração com fenilefrina (1,7mM). Ainda, as respostas ao AP39 e NaHS foram avaliadas após inibição farmacológica das enzimas ciclo-oxigenases (com indometacina), óxido nítrico sintases (com L-NAME), guanilato ciclase solúvel (com ODQ), fosfodiesterase V (com sildenafila), produtoras de H2S (com AOAA), bloqueio inespecífico dos canais de potássio (com TEA), dos canais de potássio sensíveis a ATP (KATP; com glibenclamida) ou dos canais de potássio ativados por cálcio (com apamina). Valores de resposta máxima (Emax) e potência (pA2; -log da concentração molar de agonista que causa 50% da resposta máxima) foram calculados a partir das curvas de concentração vs. resposta. A expressão gênica e proteica das enzimas produtoras de H2S (CSE, CBS e 3MPST) foram analisadas por RT-PCR e Western blotting, respectivamente e a produção de H2S pelos homogenatos das artérias pelo método colorimétrico baseado na formação de sulfeto de chumbo. Os experimentos de RT-PCR revelaram a expressão gênica das enzimas CSE e 3MPST, enquanto os experimentos de Western blotting evidenciaram a expressão proteica de todas as enzimas. A inibição não seletiva das enzimas produtoras de H2S pelo AOAA aboliu a produção endógena de H2S, ao passo que PAG (inibidor seletivo da CSE) ou o NPS (doador de NO), reduziram-na em cerca de 50%. O vasorelaxamento promovido por todos os doadores de H2S testados mostraram-se dependentes da presença do endotélio e especificamente dependentes da sinalização do NO e abertura de canais de potássio. Entretanto, o H2S endógeno mostrou-se participante do mecanismo de ação do AP39 e a inibição de KATP não atenuou o vasorelaxamento do AP39, contrastando ao NaHS. No presente estudo evidenciou-se o vasorelaxamento induzido pelos diferentes doadores de H2S. Notou-se diferenças nos mecanismos de ação, provavelmente associadas às diferenças de mecanismos de liberação e localização do H2S. Ainda, a maior potência na ordem de dez vezes do AP39 em comparação ao NaHS confere uma vantagem aos doadores mitocondriais de H2S. Considerando os achados do presente estudo, bem como seus efeitos anteriormente descritos, os doadores mitocondriais de H2S podem demonstrar uma boa perspectiva para o tratamento das doenças cardiovasculares.