Identificação de proteínas diferencialmente expressas na região cambial de Eucalyptus grandis durante a indução da formação da madeira de reação - Salvato, Fernanda (2010)
A madeira é um tecido complexo e variável que se encontra sob o controle dos diversos estádios de desenvolvimento e do ambiente. Um modelo experimental freqüentemente utilizado para o estudo do processo da formação da madeira tem sido a indução da formação da madeira de reação. A madeira de reação é formada em resposta a um estímulo gravitacional e está associada com um aumento na taxa de crescimento, modificação química e estrutural na parede celular das fibras. A madeira de reação formada no lado superior do tronco inclinado é chamada de madeira de tração, enquanto que a madeira formada no lado inferior do tronco inclinado é chamada de madeira oposta. Uma das principais características da madeira de tração é a deposição de uma camada gelatinosa na parede celular secundária, que é rica em celulose altamente cristalina. Com o objetivo de caracterizar as alterações na expressão gênica e no perfil de proteínas durante a formação da madeira de reação em Eucalyptus grandis, árvores de 1,8 anos de idade foram inclinadas sob um ângulo fixo (45º) e amostras da região cambial foram coletadas após 15, 30 e 60 dias da região do tronco com a curvatura mais acentuada. Proteínas e RNA foram extraídos da região do xilema em diferenciação da madeira de tração e da madeira oposta, e foram comparadas às da madeira normal (controle) utilizando uma abordagem proteômica (géis 2D e LC-MS/MS) e PCRsq. As análises foram focadas em genes e proteínas relacionadas à modificação e formação da parede celular. 480 spots de proteínas foram identificados e classificados em categorias funcionais, com particular atenção dada às proteínas relacionadas ao metabolismo de UDP-açúcares (incluindo a biossíntese de celulose), biossíntese de lignina e citoesqueleto. Além disso, a expressão relativa dos transcritos relacionados à biossíntese de celulose e lignina, ao metabolismo de pectinas e ao citoesqueleto foram analisadas através de PCRsq na madeira controle, de tração e oposta. Diversas diferenças no padrão de expressão de genes e proteínas envolvidas nas mudanças estruturais e da composição da parede celular secundária em relação à madeira normal foram observadas ao longo do período de indução. A deposição da camada G foi observada após 60 dias de indução da madeira de tração, através de secções transversais coradas com safranina e azul de astra. Ao longo do tempo de indução, os resultados sugerem um aumento no fluxo do carbono para a biossíntese de lignina na madeira oposta e para a biossíntese de celulose na madeira de tração. Assim, este trabalho resultou na caracterização dos perfis de expressão de proteínas e genes envolvidos nos mecanismos moleculares da formação da madeira sob estresse gravitacional e mais precisamente no remodelamento da parede celular secundária durante a formação da camada G.