Efeito de fatores de crescimento no cultivo in situ sobre o desenvolvimento e apoptose de folículos pré-antrais ovinos - DUARTE, Sandra Silva (2017)
A manipulação e cultivo de oócitos inclusos em folículos ovarianos pré-antrais é uma das principais ferramentas utilizadas atualmente para estudos da foliculogênese inicial e resgate de oócitos primários, para cultivá-los in vitro até a maturação. O objetivo deste trabalho foi estudar um sistema de cultivo eficiente para a etapa do desenvolvimento folicular pré-antral, utilizando IGF-1, EGF e FSH. Foi realizado o cultivo in situ de fragmentos de córtex ovariano de ovinos, cultivados por oito dias em αMEM+ adicionado de IGF-1, FSH e EGF, isolados e/ou associados. Amostras foram analisadas por histologia clássica e imuno-histoquímica (TUNEL), foram mensurados os diâmetros foliculares e os folículos classificados em primordiais e em desenvolvimento (primários e secundários), em normais/anormais e com ou sem apoptose. As expressões relativas de RNAm dos genes relacionados à apoptose, Bcl2, Bax e Caspases 3 e 9, nos fragmentos ovarianos, foram avaliadas pela técnica de PCR em tempo real. O cultivo com diferentes concentrações de IGF-1, demonstrou que 50 ng/mL proporcionou maior ativação do crescimento dos folículos, comparados às outras concentrações (P < 0,05). O IGF-1 associado ao FSH melhorou a ativação folicular, a normalidade dos folículos e reduziu a apoptose folicular (P < 0,05). A expressão relativa da Caspase 9 foi reduzida (P < 0,05) nos cultivos contendo IGF-1, associado ou não ao FSH, porém não foi observada diferença para os outros genes (P > 0,05). Da mesma forma a associação de IGF-1 ao EGF com ou sem adição de FSH foi eficiente para melhoria do cultivo in vitro de fragmentos ovarianos de ovelhas por 8 dias, seja na qualidade morfológica, quanto na redução da apoptose (P < 0,05). Conclui-se que 50 ng/mL de IGF-1 é a concentração mais eficaz para o desenvolvimento de folículos pré-antrais cultivados inclusos no tecido ovariano ovino, pelo período de 8 dias. A associação de IGF-1 ao EGF ou ao FSH são eficientes para melhorar o desenvolvimento dos folículos e reduzir os níveis de apoptose nestas condições de cultivo, favorecendo o equilíbrio entre os fatores apoptóticos estudados.