Cultivo in vitro de espécies de helicônia (Heliconia spp.) mediante embriogênese somática e embriões zigóticos - SILVA, Cláudia Ulisses de Carvalho (2005)
Visando estabelecer protocolos para a indução de calos embriogênicos em espécies de helicônia, foram realizados dois experimentos, onde o primeiro constou de três ensaios. O primeiro ensaio consistiu de combinações de AIA (ácido 3-indolilacético) (0; 1; 1,5; 2 e 2,5 mg.L-1) com 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) (0; 3; 4; e 5 mg.L-1) e o segundo ensaio combinou o BAP (6- benzilaminopurina) (0; 1; 1,5; 2; 2,5 mg.L-1) com 2,4-D (0; 3; 4; e 5 mg.L-1), utilizando em ambos secções de ovários de H. chartacea Lane ex Barreiros cv. Sexy Pink. O terceiro ensaio foi estabelecido a partir de combinações entre três níveis de AIA (0; 1 e 2 mg.L-1) e cinco níveis de 2,4-D (0; 5; 10; 15 e 20 mg.L-1), utilizando como explante, secções de ovários das cultivares Sexy Pink e Sexy Scarlet da espécie H. chartacea. No segundo experimento foi utilizado como explante, embriões zigóticos de H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two em combinações de AIA (0; 1 e 2 mg.L-1) e 2,4-D (0; 5; 10; 15 e 20 mg.L-1). As avaliações em ambos experimentos foram realizadas aos 30, 60 e 90 dias após a inoculação, considerando o aspecto dos calos e a presença de nódulos, através de observações visuais com o auxílio de estereomicroscópio, além de análises citoquímica, histológica e de microscopia eletrônica de varredura. No experimento 1 o índice de formação de calos nos explantes tratados com AIA+2,4-D (Ensaio I), foi superior àquele observado com as combinações de BAP+2,4-D (Ensaio II), ao final dos 90 dias de cultivo, onde observou-se a presença de células pró-embriogênicas. No terceiro ensaio a cultivar Sexy Pink apresentou um maior índice de formação de calos do que a cultivar Sexy Scarlet , mas, esses calos não apresentaram a formação de embriões somáticos ao final dos 90 dias de cultivo. No segundo experimento, a formação de pró-embriões somáticos ocorreu apenas nos embriões zigóticos provenientes de frutos maduros de H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two cultivados na ausência de reguladores de crescimento. Objetivando avaliar o processo de micropropagação a partir do cultivo de embriões zigóticos, foi realizada inicialmente uma análise da estrutura interna do embrião proveniente de frutos imaturos e maduros. Para isto, foram incluídos em parafina e seccionados em micrótomo. Os embriões provenientes de frutos imaturos e maduros foram inoculados em meio MS (Murashige e Skoog) com diferentes concentrações de sais (MS completo e ½ MS), de GA3 (ácido giberélico) (0; 2,5 e 5,0 mg.L-1), além de sacarose ou glicose (30 g.L-1), para avaliar a conversão do embrião em planta. As avaliações considerando o desenvolvimento da parte aérea e o número de raízes foram realizadas aos 15, 30 e 60 dias após a inoculação, com base em observações visuais e parâmetros quantitativos. Em seguida, as plantas obtidas foram repicadas e transferidas para meio MS (MS completo ou ½ MS), acrescido de 0 ou 2,5 mg.L-1 BAP com o objetivo de avaliar a multiplicação aos 30 e 45 dias após a inoculação. Para avaliar a variabilidade genética das plantas provenientes de embriões zigóticos, utilizou-se sistemas isoenzimáticos (PO, EST, ACP, GOT, ADH e MDH). Avaliando a estrutura interna dos embriões, observou-se que os embriões maduros apresentam tecidos em estádios de diferenciação mais avançados do que os embriões imaturos, como já era esperado. Na fase de conversão dos embriões em plantas, observou-se que 85% dos embriões provenientes de frutos maduros converteram-se em plantas normais em meio MS reduzido à metade da concentração dos sais, utilizando a sacarose como fonte de carboidrato, enquanto que os embriões cultivados em meios com glicose, apenas 41% converteram-se em plantas. Na fase de multiplicação, as plantas cultivadas em meio MS com 50% da concentração dos sais acrescido de 2,5 mg.L-1 de BAP, apresentaram maior número de gemas aos 45 dias de cultivo. Quanto a análise isoenzimática foi observado algumas alterações nos padrões isoenzimáticos no que se refere a intensidade de coloração e a migração de algumas bandas. Esses comportamentos podem estar associados respectivamente, a diferença de idade entre a planta matriz e as plantas obtidas in vitro e/ou alguma variação no fenótipo eletroforético das plantas provenientes do cultivo in vitro de embrião zigótico.