Padronização de uma PCR-RFLP e comparação com métodos tradicionais para identificação das principais espécies de dermatófitos em amostras clínicas de cães e gatos - LEAL, Carlos Adriano de Santana (2013)
Objetivou-se com este estudo padronizar uma técnica de PCR-RFLP e compará-la com métodos tradicionais de identificação de dermatófitos em amostras clínicas de cães e gatos. Foram analisadas 150 amostras clínicas de animais com dermatopatias. Nas amostras de pelos e/ou crostas foram realizados exames direto com KOH (30%) e cultura em ágar dextrose Sabouraud adicionado de extrato de levedura, cloranfenicol e ciclo-heximida. O DNA foi extraído das colônias, após a avaliação das características macro e microscópicas, bem como das amostras clínicas, com o kit de extração DNeasy Blood & Tissue (QIAGEN®). Os Primers utilizados foram o ITS 1 e o ITS 4. Os Amplicons foram digeridos pela enzima de restrição BseBI. Para o estudo de concordância entre os testes utilizou-se o coeficiente de Kappa (K). Após a análise dos resultados observou-se padrões de bandas diferentes que identificam Microsporum canis, Microsporum gypseum e Trichophyton mentagrophytes. Observou-se também uma excelente concordância entre os resultados da cultura e da PCRRFLP de 87,5% (7/8). Outra observação feita foi a de que amostras negativas nos métodos tradicionais (exame direto e cultura), mas que estavam contaminadas com o agente, foram identificadas pela técnica molecular, indicando uma maior sensibilidade da mesma. Concluise, então, que a PCR-RFLP é mais sensível e tão específica quanto os métodos de rotina, o que permite que a mesma seja utilizada para a identificação mais rápida destas espécies de dermatófitos em amostras clínicas de cães e gatos.