Avaliação in vitro de espermatozóides caprinos criopreservados em diluente à base de leite desnatado acrescido de glutationa reduzida e trolox em diferentes concentrações - SOARES, Adriana Trindade (2010)
Objetivando-se avaliar in vitro o efeito da congelação de espermatozoides caprinos em diluente à base de leite desnatado acrescido de Trolox e Glutationa reduzida (GSH) em diferentes concentrações, utilizou-se sêmen de cinco reprodutores, colhido com vagina artificial, em seis repetições. Após avaliação subjetiva (turbilhonamento, motilidade, vigor e concentração espermática) de cada ejaculado, procedeu-se à formação do pool e diluição (240x106 espermatozoides/mL) com leite desnatado e glicerol 7%, acrescido de antioxidantes, de acordo com o experimento: Exp. 1) G1= Controle, G2= Trolox 30μM, G3= Trolox 60μM e G4= Trolox 120μM; Exp. 2) G1= Controle, G2= GSH 2mM, G3= GSH 5mM e G4= GSH 7mM. Em seguida, as amostras foram acondicionadas em palhetas (0,25mL), congeladas e armazenadas em botijão criobiológico (-196 oC). Após descongelação (37oC/30 segundos), alíquotas de sêmen de cada grupo foram avaliadas quanto a integridade de membrana plasmática (iMP) e acrossoma (iAc), potencial de membrana mitocondrial (PMM), cinética espermática e ultraestrutura. As análises de iMP, iAc, PMM e cinética dos espermatozoides caprinos criopreservados em meio adicionado de diferentes concentrações de Trolox e GSH, não evidenciaram diferença significativa (P>0,05) entre os grupos. A ultraestrutura foi avaliada em amostras de sêmen in natura e pós descongelação. Nos Exps. 1 e 2, as análises de iMP, iAc, PMM e cinética espermática dos espermatozoides caprinos criopreservados não evidenciaram diferença significativa (P>0,05) entre os gruposControle e Trolox (30, 60 e 120 μM/mL). No Exp. 1, a análise ultraestrutural evidenciou que os porcentuais de acrossoma, membrana plasmática da região da cauda e axonema íntegros não diferiram (P>0,05) entre grupos (Controle e Trolox 30, 60 e 120 μM/mL), mas foram inferiores (P<0,05) aos do sêmen in natura.Entretanto, as amostras dos grupos Trolox 60μM/mL e Trolox 120μM/mL apresentaram maior porcentagem (P<0,05) de espermatozóides com membrana plasmática intacta na região da cabeça do que as dos grupos Controle e Trolox 30μM/mL, mas não diferiram (P>0,05) do sêmen in natura. Maior porcentagem (P<0,05) de espermatozides com mitocôndrias intactas foi observada nas amostras de sêmen in natura, e dos grupos Controle e Trolox 60μM/mL do que naquelas do Trolox 30μM/mL e 120μM/mL. No Exp. 2, a análise ultraestrutural demonstrou que os porcentuais de membrana plasmática (cabeça e cauda) e acrossoma íntegros não diferiram (P>0,05) entre os grupos Controle e GSH (2, 5 e 7mM/mL), mas foram inferiores (P<0,05) aos do sêmen in natura. Todavia, as amostras de sêmen in natura e do grupo Controle apresentaram maior porcentual (P<0,05) de gametas com axonema íntegros do que as dos grupos tratados com GSH (2, 5 e 7mM/mL). Maior porcentagem (P<0,05) de espermatozóides com mitocôndrias íntegras foi observada nas amostras de sêmen do grupo Controle do que nos tratados com GSH (5 e 7mM/mL), e não diferirem das amostras do sêmen in natura e do GSH 2mM/Ml. Com base na análise ultraestrutural, é possível concluir que Trolox 60 μM/mL pode ser adicionado ao diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado e glicerol 7%, visando preservar a integridade da membrana plasmática na região da cabeça dos espermatozoides. Todavia, a adição de GSH (2, 5 e 7mM/mL) em diluente de congelação de sêmen caprino, à base de leite desnatado e glicerol 7%, não preserva a integridade dos espermatozoides.